【摘 要】
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目的 研究丹酚酸C对Mpp+诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用.方法 SH-SY5Y细胞与丹酚酸C(0.1,1.0和5.0 μmol·L-1)或阳性药N-乙酰半胱氨酸(NAC)5 mmol·L-1孵育2h后加入MPP+ 500
【机 构】
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中国医学科学院&北京协和医学院药物研究所,天然药物活性物质与功能国家重点实验室,药物靶点研究与新药筛选北京市重点实验室,北京100050
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目的 研究丹酚酸C对Mpp+诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用.方法 SH-SY5Y细胞与丹酚酸C(0.1,1.0和5.0 μmol·L-1)或阳性药N-乙酰半胱氨酸(NAC)5 mmol·L-1孵育2h后加入MPP+ 500 μmol·L-1,继续培养24 h.MTT法检测细胞存活率,AO/EB染色观察细胞形态及凋亡,应用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,线粒体超氧化物指示剂(MitoSOX)特异性探针检测线粒体超氧化物水平,JC-1检测线粒体膜电位,免疫荧光法测定NADPH氧化酶2(NOX2)的表达,免疫荧光和Western蛋白质印迹法检测细胞色素c,Bcl-2,Bax和活化的胱天蛋白酶3的表达水平.结果 MPP+ 500 μmol· L-1损伤导致细胞存活率显著降低(P＜0.01),丹酚酸C(1.0和5.0 μmol· L-1)及NAC(5 mmol·L-1)能够逆转Mpp+损伤,显著提高细胞存活率(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).丹酚酸C(1.0和5.0 μmol· L-1)能够显著减少Mpp+诱导的细胞总ROS增加(P＜0.01),维持Bax/Bcl-2表达平衡(P＜0.01),减缓线粒体膜电位降低(P＜O.05,P＜0.01),减少细胞色素c的释放(P＜0.01)及胱天蛋白酶3的活化(P＜0.05,P＜0.01).同时,丹酚酸C(0.1,1.0和5.0 μmol· L-1)能够明显抑制NOX2的表达(P＜0.01),降低线粒体内超氧化物水平(P＜0.01),改善Mpp+引起的细胞氧化应激状态.结论 丹酚酸C能够抑制Mpp+诱发的SH-SY5Y细胞氧化应激及其介导的细胞凋亡.
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