【摘 要】
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目的 在CHO细胞中稳定表达水痘一带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(gE).方法 PCR扩增VZV gE完整胞外结构域编码基因,克隆至哺乳动物细胞表达质粒PSGHVO中,与DHFR选择性基因和脂质体
【机 构】
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上海生物制品研究所,上海,200052
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目的 在CHO细胞中稳定表达水痘一带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(gE).方法 PCR扩增VZV gE完整胞外结构域编码基因,克隆至哺乳动物细胞表达质粒PSGHVO中,与DHFR选择性基因和脂质体共转染CHO/dhfr-细胞,筛选稳定分泌人生长激素(hGH)和gE融合蛋白的细胞株.采用ELISA和Western blot方法检测细胞培养上清中hGH和gE融合蛋白的表达,并用Ni2+-NTA柱进行纯化.结果 gE基因PCR扩增产物和重组表达质粒PSGHVO-gE的双酶切产物经琼脂糖凝胶电泳,均可见1 500 bp的目的 基因条带.转染PSGHVO-gE质粒和DHFR基因的细胞培养上清液经ELISA和Western blot,确认有重组蛋白表达,gE表达量约为20 mg/L;纯化后蛋白纯度约为90%.结论 已在CHO细胞中稳定表达了VZV gE蛋白,为制备VZV表面抗原奠定了基础.
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