观察细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及蛋白激酶B(Akt)信号通路在微RNA－21(miR－21)促进胆管癌细胞侵袭转移中的作用。
方法采用实验研究方法。体外培养胆管癌细胞QBC939细胞，通过构建合成无关序列、miR－21 mimics和miR－21 inhibitor并转染到细胞中，将细胞分为4组：cell组：自然生长细胞，21－NC组：转染无关序列，21－M组：转染miR－21 mimics，21－I组：转染miR－21 inhibitor。另取21－M组细胞进一步分为2组，分别加入20 μmol/L LY294002和10 μmol/L U0126处理48 h，用于后续实验。检测指标：(1)RT－qPCR检测miR－21在各组胆管癌细胞中的表达。(2) Werstern blot检测各组胆管癌细胞第10号染色体缺失的张力同源性磷酸酶(PTEN)、ERK及Akt蛋白的相对表达量。(3)划痕实验检测各组胆管癌细胞迁移能力。(4)Transwell实验检测各组胆管癌细胞迁移与侵袭能力的影响。正态分布的计量资料以
±s表示，两组均数比较采用t检验，多组均数比较采用方差分析，组间两两比较采用Bonferroni检验，重复测量数据采用重复测量方差分析。
(1)miR－21在cell组、21－NC组、21－M组及21－I组中的相对表达量分别为1.010±0.010、0.980±0.050、4.900±0.350、0.260±0.010，4组比较，差异有统计学意义(F＝78.23，P<0.05)。21－NC组miR－21表达分别与cell组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。21－M组miR－21表达较cell组增加，21－I组较cell组减少，21－M组和21－I组分别与cell组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)cell组、21－NC组、21－M组、21－I组细胞PTEN蛋白相对表达量分别为0.360±0.020、0.400±0.030、0.140±0.010、0.680±0.110，ERK蛋白相对表达量分别为0.045±0.126、0.470±0.140、0.460±0.060、0.440±0.110，p－ERK蛋白相对表达量分别为0.310±0.020、0.380±0.040、0.590±0.060、0.160±0.010，Akt蛋白相对表达量分别为0.400±0.010、0.390±0.080、0.410±0.090、0.380±0.070，p－Akt蛋白相对表达量分别为0.440±0.110、0.510±0.120、0.980±0.150、0.190±0.010，4组细胞PTEN、p－ERK、p－Akt蛋白相对表达量比较，差异均有统计学意义(F＝10.23，12.78，18.11，P<0.05)，与cell组比较，21－NC组PTEN、ERK、p－ERK、Akt、p－Akt表达，差异均无统计学意义(P>0.05)；而21－M组与cell组比较，PTEN表达减少，p－ERK和p－Akt表达增加，差异有均有统计学意义(P<0.05)；21－I组与cell组比较，PTEN表达增加，而p－ERK和p－Akt表达降低，差异有统计学意义(P<0.05)。(3)cell组、21－M组、miR－21＋LY294002组、miR－21＋U0126组细胞6～48 h迁移率变化范围为12.0%±3.0%～23.0%±5.0%，21.0%±4.0%～43.0%±7.0%，6.0%±1.0%～18.0%±4.0%，9.0%±2.0%～26.0%±6.0%。与cell组比较，21－M组细胞迁移能力各时间点迁移率更高，两组迁移率变化趋势比较，差异有统计学意义(F＝16.23，P<0.05)。miR－21＋LY294002组、miR－21＋U0126组迁移率较21－M组下降，3组迁移率趋势比较，差异有统计学意义(F＝25.21，P<0.05)，3组迁移率变化趋势与时间交互效应，具有统计学意义(F＝35.31，P<0.05)。(4)cell组、21－M组、miR－21＋LY294002组、miR－21＋U0126组迁移细胞数分别为(198±32)个、(248±39)个、(187±23)个、(174±28)个，4组比较，差异有统计学意义(F＝8.48，P<0.05)；21－M组与cell组比较，差异有统计学意义(t＝4.13，P<0.05)；miR－21＋LY294002组、miR－21＋U0126组迁移细胞数较21－M组下降，3组比较，差异有统计学意义(F＝21.98，P<0.05)。cell组、21－M组、miR－21＋LY294002组、miR－21＋U0126组侵袭细胞数分别为(102±22)个、(211±36)个、(55±9)个、(67±13)个，4组比较，差异有统计学意义(F＝11.32，P<0.05)；21－M组与cell组比较，差异有统计学意义(t＝6.67，P<0.05)；miR－21＋LY294002组、miR－21＋U0126组侵袭细胞数较21－M组下降，3组比较，差异有统计学意义(F＝36.23，P<0.05)。
结论ERK及Akt信号通路参与了miR－21促进胆管癌细胞侵袭迁移，PTEN可能介导了miR－21通过ERK及Akt通路促进胆管癌侵袭转移的过程。