【摘 要】
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分离、培养大鼠胚胎后肾间充质细胞(MMCS),取孕13d大鼠胚胎,分离胚胎肾脏,去除输尿管芽,消化后置37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养.倒置相差显微镜下观察培养细胞,并行HE
【机 构】
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分离、培养大鼠胚胎后肾间充质细胞(MMCS),取孕13d大鼠胚胎,分离胚胎肾脏,去除输尿管芽,消化后置37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养.倒置相差显微镜下观察培养细胞,并行HE染色、电镜观察、生长曲线测定;ABC免疫酶染色法检测波形蛋白、角蛋白、nestin、CD133、CD34;直接免疫荧光法检测双花扁豆凝集素(Dolichos Biflorus,DB),并流式细胞术定量检测.MMCS形态为成纤维细胞样,贴壁生长,48～72h达生长高峰;波形蛋白、nestin、CD133表达阳性;角蛋白、CD34、DB表达阴性;MMCS以DB标记后流式细胞检测为单峰.结果表明:培养细胞为后肾间充质细胞,纯度较高并符合干细胞特征.
Rat embryonic rat renal mesenchymal cells (MMCS) were isolated and cultured. The embryos of 13 days old embryos were isolated and the embryonic kidney was isolated. The ureteral buds were removed and digested and incubated in an incubator at 37 ℃, 5% CO2 and saturated humidity. The cultured cells were observed by phase contrast microscopy, HE staining, electron microscopy and growth curve were used to observe the expression of vimentin, vimentin, nestin, CD133 and CD34 by ABC immunohistochemical method. Dolichos Biflorus DB), and quantitatively detected by flow cytometry.MMCS morphology was fibroblast-like, adherent growth, peaked at 48 ~ 72h, vimentin, nestin, CD133 expression was positive, keratin, CD34, DB expression was negative; DB-labeled flow cytometry was unimodal.The results showed that the cultured cells were mesenchymal cells with high purity and consistent with stem cell characteristics.
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