反相高效液相色谱与离子交换色谱测定牛肉中肌肽含量的对比研究

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目的:考察反相高效液相色谱(RP-HPLC)紫外检测与离子交换色谱(IEC)电导检测2种方法对牛肉中肌肽检测的一致程度。方法:RP-HPLC色谱条件:Agilent TC-C18色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相为乙腈-水(15∶85);柱温35℃;流速1.00 mL·min-1;进样体积25μL;检测波长210 nm。IEC色谱条件:Dionex AminoPacTM PA-10(2 mm×50 mm)保护柱和Dionex AminoPacTM PA-10(2 mm×250 mm)分析柱分离,金电极检测,直流安倍电位,检测波形为"Amino Acids(Reference)"。以70%超纯水和30%醋酸钠溶液(100 mmol)为淋洗液;Dionex AminoPacTMPA-10柱流速为0.25 mL·min-1,进样体积均为25μL。分别对2种方法的检测下限、精密度、加样回收率等进行考察,并对2种方法测得牛肉样品的结果进行显著性检验(F检验和t检验)。结果:RP-HPLC法线性范围为0.20~5.00μg·mL-1 (R2=0.999 7),检测下限和定量下限分别为0.032和0.11μg·mL-1,方法精密度(RSD)为1.2%(n=11),样品回收率为97.7%;IEC法峰形对称,线性范围为0.20~8.00μg·mL-1 (R2=0.999 0),检测下限和定量下限分别为0.005 0和0.017μg·mL-1,方法精密度(RSD)为1.2%(n=11),样品回收率为92.2%。对测定结果的F检验(方法精密度)表明两者无显著性差异,但t检验(方法系统误差)表明两者有显著差异。结论:2种方法均能较好地对样品中的肌肽进行定性和定量分析,但两者存在系统误差,原因需进一步探索。
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