【摘 要】
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目的 观察黄连解毒汤含药血清对体外调控中性粒细胞功能的影响.方法 20只SD大鼠每天给予黄连解毒汤5 g/kg灌胃,每12小时1次,共5次,制备黄连解毒汤含药血清.采用流式细胞仪分
【机 构】
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中国中医科学院中医基础理论研究所 北京100700;首都医科大学附属北京地坛医院传染病研究所 北京100015;新发突发传染病研究北京市重点实验室 北京100015
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目的 观察黄连解毒汤含药血清对体外调控中性粒细胞功能的影响.方法 20只SD大鼠每天给予黄连解毒汤5 g/kg灌胃,每12小时1次,共5次,制备黄连解毒汤含药血清.采用流式细胞仪分选C57 BL/6小鼠骨髓和外周血中性粒细胞,给予不同剂量的黄连解毒汤含药血清和脂多糖(LPS)刺激3h,采用实时荧光定量PCR检测中性粒细胞炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-13、IL-6及IL-12b表达,确定10％黄连解毒汤含药血清为最佳剂量.将10％黄连解毒汤含药血清用于干预活化的中性粒细胞功能:(1)中性粒细胞给予佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)刺激5 min,流式细胞仪检测骨髓中性粒细胞产生活性氧(ROS)情况;(2)中性粒细胞给予LPS刺激3h,采用PicoGreen dsDNA定量检测试剂盒检测培养上清游离DNA(cf-DNA)的含量;(3)免疫荧光法检测中性粒细胞形成的中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)情况;(4)中性粒细胞给予趋化因子CXCL2、CXCL10、CCL3诱导3h,流式细胞仪检测趋化的中性粒细胞数量;(5)中性粒细胞给予LPS刺激20 h,流式细胞仪检测外周血中性粒细胞凋亡情况.结果 PMA刺激中性粒细胞使ROS显著增多(P＜0.05);LPS刺激3h,中性粒细胞产生的cf-DNA含量增多,NETs形成增加,CXCL2,CXCL 10、CCL3使中性粒细胞趋化增多(P＜0.05,P＜0.01);LPS刺激20 h后,外周血中性粒细胞凋亡减少(P＜0.05);10％黄连解毒汤含药血清可减少ROS产生,降低cf-DNA含量和NETs形成,减少中性粒细胞趋化,促进中性粒细胞凋亡(P＜0.05,P＜0.01).结论 黄连解毒汤可调节中性粒细胞功能.
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