【摘 要】
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目的 了解胰岛素样生长因子Ⅰ(insudin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)在三维培养环境中对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)生长、分化的影响,以期为进
【机 构】
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解放军总医院军医进修学院08博士队,北京,100853;解放军306医院全军口腔疾病诊治中心;解放军306医院病理实验科
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目的 了解胰岛素样生长因子Ⅰ(insudin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)在三维培养环境中对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)生长、分化的影响,以期为进一步研究牙周组织的再生提供实验依据.方法 从手术拔除的8颗前磨牙或第三磨牙中获取牙周膜组织,利用有限稀释法培养获得hPDLC.采用旋转细胞培养系统(rotary cell culture system,RCCS)建立三维培养环境,根据培养液中加入IGF-Ⅰ的不同质量浓度分为对照组(0 μg/L)和5个实验组(0.1、1、10、50及100μg/L),甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖情况.成骨诱导培养中加入上述不同质量浓度的IGF-Ⅰ,分光光度计法检测碱性磷酸酶(alkine phosphatase,ALP)浓度,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨钙素及Ⅰ型胶原基因表达水平.结果 三维培养下,各实验组IGF-Ⅰ对细胞增殖的作用均显著高于对照组(P＜0.05),其中IGF-Ⅰ 0.1μg/L组细胞增殖活性(0.219±0.021)与50μg/L组(0.287±0.011)、100 μg/L组(0.293±0.012)相比差异均有统计学意义(P＜0.05),其余组间差异均无统计学意义(P＞0.05).各实验组ALP活性均显著高于对照组(P＜0.05),1μg/L组(0.304±0.020)与10 μg/L组(0.310±0.013)相比差异无统计学意义,50 μg/L组(0.347±0.011)与100μg/L组(0.344±0.010)相比差异无统计学意义,但50、100 μg/L组显著高于1、10μg/L组,且四组均显著高于0.1 μg/L组(0.212±0.011),P＜0.05.Ⅰ型胶原及骨钙素的产物表达在mRNA水平及蛋白水平均呈现随浓度升高而升高的趋势.结论 在本实验三维培养条件下,IGF-Ⅰ对hPDLC的促增殖作用在0.1～100μg/L范围内呈浓度依赖性增强;100 μg/L IGF-Ⅰ在三维培养条件下具有明确的促hPDLC成骨向分化的作用.
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