【摘 要】
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目的克隆、表达梅毒螺旋体(Tp)外膜蛋白Tp0453,建立间接ELISA法,探讨其在梅毒血清学诊断中的应用。方法构建重组质粒pQE32/Tp0453,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和免疫印迹鉴定表达
【基金项目】
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湖南省教育厅重点基金课题(02A046)
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目的克隆、表达梅毒螺旋体(Tp)外膜蛋白Tp0453,建立间接ELISA法,探讨其在梅毒血清学诊断中的应用。方法构建重组质粒pQE32/Tp0453,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和免疫印迹鉴定表达结果;Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人血清中特异性IgG抗体。结果成功构建了重组质粒pQE32/Tp0453;SDS-PAGE检测诱导产物显示有一分子量约为32000的特异蛋白带,免疫印迹检测其只与TpIgG抗体具有阳性反应;重组蛋白用作ELISA包被抗原检测Tp阴阳性参比血清,特异度和灵敏度均为100%;检测患者血清中特异性IgG抗体结果与TPPA法符合率为98·2%。结论表达的Tp0453重组蛋白具有较好的免疫反应活性,可望用于梅毒的血清学诊断。
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