论文部分内容阅读
背景:淀粉样β蛋白是阿尔茨海默病致病关键因素之一。近来的研究证明在成人中枢神经系统内存在能不断自我更新、多向分化潜能、终身神经修复的神经干细胞。但是在阿尔茨海默病脑内却未见到这些神经前体细胞的起到有效作用,其机制尚未清楚。淀粉样β蛋白1～40是否通过c-Jun氨基端激酶信号转导通路对胚胎大鼠皮质神经前体细胞造成神经毒性损害尚不清楚。目的:体外实验淀粉样β蛋白1～40对胚胎中皮质神经前体细胞毒性作用中c-Jun氨基端激酶信号转导通路的可能作用机制,探讨c-Jun氨基端激酶抑制剂SP600125对淀粉样β蛋白1～40致胚胎中皮质神经前体细胞神经毒性作用的保护作用。设计:以细胞为观察对象,随机对照实验。单位:中国医科大学附属第一医院神经内科。材料:实验于2005-05/10在中国医科大学中心实验室完成。选用10只孕14dWistar大鼠,取其胚胎以备实验。方法:取Wistar大鼠胚胎脑皮质组织神经前体细胞,体外培养、传代、鉴定。将生长状态良好的胚胎大鼠皮质神经前体细胞随机分为4组:淀粉样β蛋白1～40组(每孔加入10nmol/Lβ淀粉样蛋白1～40);SP600125+淀粉样β蛋白1～40组(每孔先加入10μmol/LSP600125培养30min后再加入10nmol/L淀粉样β蛋白1～40);SP600125组(每孔加入10μmol/LSP600125培养);生理盐水组(每孔加入等体积的生理盐水),每组分别培养0,2,4,6,12,24h,每个时间点设8个孔。采用α甲基偶氮唑蓝法测定细胞生存率。流式细胞分析术检测细胞凋亡率。免疫印迹法检测c-Jun氨基端激酶,p-c-Jun氨基端激酶,c-Jun,p-c-Jun表达。计量资料差异比较采用t检验。主要观察指标:①Wistar大鼠胚胎皮质神经前体细胞细胞生存率。②胚胎中皮质神经前体细胞细胞凋亡率。③胚胎中皮质神经前体细胞c-Jun氨基端激酶,p-c-Jun氨基端激酶,c-Jun,p-c-Jun表达结果。结果:①淀粉样β蛋白1～40组和SP600125+淀粉样β蛋白1～40组细胞生存率随培养时间延长而下降,4h时下降最明显;培养0,2,4,6,12,24h时淀粉样β蛋白1～40组明显低于其他3组(P<0.01),SP600125+淀粉样β蛋白1～40组培养2,4,6,12,24h明显低于SP600125组和生理盐水组(P<0.01)。SP600125组细胞生存率无时间依赖性,与生理盐水组相比,差异不明显(P>0.05)。②淀粉样β蛋白1～40组和SP600125+淀粉样β蛋白1～40组细胞凋亡率随培养时间延长而上升,4h时上升最明显;培养0,2,4,6,12,24h时淀粉样β蛋白1～40组明显高于其他3组(P<0.01),SP600125+淀粉样β蛋白1～40组培养2,4,6,12,24h明显高于SP600125组和生理盐水组(P<0.01)。SP600125组细胞生存率无时间依赖性,与生理盐水组相比,差异不明显(P>0.05)。③淀粉样β蛋白组:c-Jun氨基端激酶和c-Jun在培养0,2,4,6,12,24h均有表达,但无变化;p-c-Jun氨基端激酶和p-c-Jun在淀粉样β蛋白1～40作用0h时即有表达,逐渐增高,4h时达高峰,以后逐渐减少。结论:淀粉样β蛋白1～40能明显抑制胚胎中皮质神经前体细胞细胞活性,降低细胞生存率,导致细胞凋亡,c-Jun氨基端激酶信号转导通路参与了此过程,这可能是阿尔茨海默病不能启动自我救活机制原因之一;使用SP600125,可抑制c-Jun氨基端激酶和c-Jun激活,明显减轻淀粉样β蛋白1～40对胚胎中皮质神经前体细胞的神经毒性作用。