【摘 要】
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目的构建并鉴定靶向大鼠血管平滑肌细胞信号传导子及转录激活子3(STAT3)基因的慢病毒干扰载体。方法针对STAT3基因的不同部位设计4对短发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸片段,克隆到
【机 构】
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苏州大学附属第四医院心胸外科,南京医科大学附属南京第一医院心胸外科,
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目的构建并鉴定靶向大鼠血管平滑肌细胞信号传导子及转录激活子3(STAT3)基因的慢病毒干扰载体。方法针对STAT3基因的不同部位设计4对短发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸片段,克隆到慢病毒干扰载体PLKO.1中,构建shRNA慢病毒干扰载体PLKO.1-STAT3-shRNA-1、2、3、4,并感染大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞。Western blot法检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体。结果 Western blot法证实PLKO.1-STAT3-shRNA-1、2、3、4均能抑制细胞内STAT3基因的表达,以PLKO.1-STAT3-S1最为明显。用PLKO.1-STAT3-S1转染血管平滑肌细胞后可以促进细胞凋亡。结论成功构建了靶向STAT3基因的shRNA慢病毒干扰载体。
Objective To construct and identify lentivirus vectors targeting rat vascular smooth muscle cells signal transducers and activator of transcription 3 (STAT3) gene. Methods Four pairs of short hairpin RNA (shRNA) oligonucleotide fragments were designed according to different parts of STAT3 gene and cloned into lentiviral vector PLKO.1 to construct shRNA lentiviral vector PLKO.1-STAT3-shRNA-1. 2,3,4, and infected rat thoracic aortic vascular smooth muscle cells. Western blot was used to detect and screen the shRNA vector with the best inhibitory efficiency. Results Western blot showed that PLKO.1-STAT3-shRNA-1, 2, 3 and 4 inhibited the expression of STAT3 gene in PLKO.1-STAT3-S1 cells. Transfection of vascular smooth muscle cells with PLKO.1-STAT3-S1 can promote apoptosis. Conclusion The shRNA lentiviral vector targeting STAT3 gene was successfully constructed.
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