新型氯霉素化学发光芯片免疫检测方法的建立及应用

• 作 者: 任帅 丁乔棋 李丽 邵漫雨 宋素泉 闫丽萍
• 机 构: 南京农业大学动物医学院,南京农业大学教育部动物健康和食品安全国际联合实验室,南京农业大学江苏省动物免疫工程实验室,江苏省陆生野生动物疫源疫病检测中心
• 出 处: 分析化学
• 发表日期: 2018年10期
• 关键词: 氯霉素 多克隆抗体 间接竞争酶联免疫分析 化学发光 芯片免疫
• 基金项目: 国家重点研发计划项目(No.2016YFD0501200);中央高校基本业务费项目(No.KYZ201848);江苏省自然基金面上项目(No.BK20161452);广东省科技计划重点项目(No.2017B020202010)资助~~

采用氯霉素（CAP）全抗原CAP-HS-BSA免疫新西兰兔,获得抗CAP多克隆抗体,测得效价为2×10⁵,此抗体与CAP结构类似物的交叉反应率均小于0.01%,特异性良好。在此基础上,分别建立了特异性检测氯霉素残留的间接竞争酶联免疫吸附法（ic-ELISA）和基于iPDMS膜的化学发光芯片免疫检测法,并用于实际牛奶样品中CAP的检测。建立的ic-ELISA法的半数抑制浓度(IC₅₀)为12.9 ng/mL,线性检测范围(IC₂₀^IC₈₀)为0.8²50.0 ng/mL,检出限(IC₁₀)为0.1 ng/mL,回归方程B/B₀=-0.2028lg C_CAP+0.7281（R²=0.9926）。牛奶样品中加标回收率为81.8%⁹7.9%,相对标准偏差（RSD）小于10%。建立的化学发光芯片免疫检测方法的半数抑制浓度为263.0 ng/mL,线性范围(IC₂₀^IC₈₀)为1⁵000 ng/mL之间,检出限(IC₁₀)为1 ng/mL,回归方程B/B₀=0.1781 lg C_CAP+0.9318（R²=0.9891）,牛奶中CAP的加标回收率为77.0%¹00.5%,RSD<15%。