【摘 要】
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目的 构建带Flag标签的肾小管间质性肾炎抗原样蛋白1(Tinagl1)基因真核表达载体,检测其对肝癌细胞HepG2 ERK/AKT磷酸化、生长和迁移的影响.方法 以人乳腺cDNA文库为模板,PCR
【机 构】
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军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京100850;徐州医科大学附属淮海医院,江苏徐州 221004;河北医科大学第三医院感染科,石家庄 071000
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目的 构建带Flag标签的肾小管间质性肾炎抗原样蛋白1(Tinagl1)基因真核表达载体,检测其对肝癌细胞HepG2 ERK/AKT磷酸化、生长和迁移的影响.方法 以人乳腺cDNA文库为模板,PCR扩增Tinagl1基因片段,将其插入pcDNA3.0载体,经双酶切和测序验证后,将重组质粒转染到肝癌HepG2细胞中,采用Western印迹检测重组蛋白对ERK和AKT磷酸化水平的影响,生长曲线和划痕实验检测其对肝癌细胞HepG2生长和迁移的影响.结果 双酶切和Western印迹结果表明,pcDNA3.0-Flag-Tinagl1真核表达质粒构建成功,Tinagl1可降低ERK和AKT的磷酸化水平;生长曲线和划痕实验表明Tinagl1抑制肝癌细胞HepG2生长和迁移.结论 构建了带Flag标签的Tinagl1真核表达载体,并能抑制肝癌细胞HepG2中ERK/AKT磷酸化、生长和迁移,为进一步研究Tinagl1在肝癌细胞中的功能奠定了基础.
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