【摘 要】
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目的:制备抗大豆Ⅱ号亚型钙调素(SCaM-2)单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法:从含有pSCaM-2的大肠杆菌BL21中, 提取并纯化SCaM-2.以其作为抗原免疫BALB/c小鼠后, 取其脾细胞
【机 构】
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第四军医大学护理士官系病原教研室,河北,石家庄,050081河北省科学院生物所,河北,石家庄,050061;河北师范大学生命科学学院,河北,石家庄,050016;
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目的:制备抗大豆Ⅱ号亚型钙调素(SCaM-2)单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法:从含有pSCaM-2的大肠杆菌BL21中, 提取并纯化SCaM-2.以其作为抗原免疫BALB/c小鼠后, 取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞经细胞融合、筛选及克隆化, 建立稳定分泌SCaM-2 mAb的杂交瘤细胞株, 并对抗SCaM-2 mAb进行鉴定.结果:经两次细胞融合, 共获得10株可稳定分泌抗SCaM-2 mAb的杂交瘤细胞株.对其中3株杂交瘤细胞制备的腹水mAb(6F11F3、 7C5E9、 7E10E2), 用间接ELISA及免疫印迹实验表明, 在高稀释度时, mAb 6F11F3可识别SCaM-1和SCaM-2, 而mAb 7C5E9和7E10E2可分别识别SCaM-4和SCaM-5.Ig亚类鉴定结果表明, mAb 6F11F3和7C5E9均为IgG2a, mAb 7E10E2为IgG1.相加实验的结果显示, mAb 6F11F3和7C5E9可能识别SCaM-2相同的抗原表位;而mAb 7E10E2可能识别不同的抗原表位.mAb 6F11F3对SCaM-2的亲和常数为(2.127±0.418)×106M-1, mAb 7C5E9对SCaM-4的亲和常数为(9.69±2.406)×106M-1, mAb 7E10E2对SCaM-5的亲和常数为(1.203±0.429)×107M-1.结论:制备了可识别不同SCaM亚型的mAb 6F11F3、 7C5E9及7E10E2, 为研究SCaM的特性及功能提供了重要的制剂.
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