【摘 要】
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为探讨亚低温对氧糖剥夺/复氧后原代神经元细胞自噬和凋亡的影响,运用原代神经元培养及OGD/R模型构建,CCK8测定细胞活力,TUNEL检测细胞凋亡,Western-blot检测Sirt1、Foxo1、R
【机 构】
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广东药科大学生命科学与生物制药学院,广东广州510006中山大学附属第一医院急诊科,广东广州510080;卫生部辅助循环重点实验室,广东广州510080;中山大学附属第一医院急诊科,广东广州,5100
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为探讨亚低温对氧糖剥夺/复氧后原代神经元细胞自噬和凋亡的影响,运用原代神经元培养及OGD/R模型构建,CCK8测定细胞活力,TUNEL检测细胞凋亡,Western-blot检测Sirt1、Foxo1、Rab7、Beclin1、LC3及p53等蛋白的表达,以及转染mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒检测神经元自噬流等方法,成功培养原代神经元及构建OGD/R模型.结果发现OGD/R后Sirt1、P-Foxo1、Rab7、Beclin1、LC3b/LC3a表达随着时间延长逐渐减少,12 h更明显,与R6 h组相比,P＜0.05,而p53增加,P＜0.05;OGD3 h/R12 h,亚低温组Sirt1、P-Foxo1、Rab7、Beclin1及LC3b/LC3a表达均明显高于常温组,P＜0.05,而p53明显低于常温组,P＜0.05.R6h亚低温组,神经元凋亡率为20％±6.7％,低于常温组的56.8％±7.6％,P＜0.05.mRFP-GFP-LC3自噬双标观察法显示亚低温组自噬溶酶体明显增多,P ＜0.05.实验显示原代神经元OGD/R后亚低温干预可以上调Sirt1的活性,增加Foxo1、Rab7和自噬相关蛋白Beclin1、LC3b/LC3a的表达,同时抑制p53,促进神经元自噬,减少凋亡.
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