套式序列特异引物聚合酶链反应技术的建立及其在HLA配型中的应用

• 作 者: 刘广贤 孔繁华 张蕊芳 金荔 陈兴国 孙成文
• 机 构: 军事医学科学院附属医院免疫室,北京,100039,
• 出 处: 中华器官移植杂志
• 发表日期: 1998年19期
• 关键词: HLA配型 序列特异 人白细胞抗原 免疫测定 基因分型 方法特异性 血清学方法 聚合酶链反应 Ⅱ类抗原 分型结果

建立套式序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法,用于HLA-DR基因分型.利用一对外引物扩增HLA-DRB1第2外显子部分片段(283bp),作为第2次扩增的模板,PCR循环参数:98℃、5分钟;94℃、60秒,72℃、30秒,63℃、30秒,15个循环;利用各组特异性引物进行第2次扩增,产生与血清学相对应的HLA-DR型别,PCR循环参数:94℃、30秒,72℃、30秒,60℃、30秒,20个循环.结果表明本方法特异性好.在7个家庭20例受试者中进行了应用,与血清学方法比较,两方法确定出的型别,80%一致,20%不同,另有血清学为"空"的8个型别,基因分型全部为DR9阳性.