【摘 要】
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目的 设计构建针对沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)具有高效抑制作用的重组蛋白,为衣原体治疗抵抗探索新的解决方法.方法 通过生物信息学方法设计VP1Cm蛋白的基因序列.
【机 构】
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天津医科大学总医院皮肤性病科,天津300052
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目的 设计构建针对沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)具有高效抑制作用的重组蛋白,为衣原体治疗抵抗探索新的解决方法.方法 通过生物信息学方法设计VP1Cm蛋白的基因序列.应用基因合成的方法构建重组质粒VP1Cm-pET28a(+)并转化至大肠杆菌中.用带Ni+的亲和树脂纯化蛋白,梯度透析复性蛋白.CCK8法测定重组蛋白对Hela细胞的毒性作用.将豚鼠嗜衣原体噬菌体PhiCPG1衣壳蛋白VP1、截短蛋白VP1C、蛋白VP1Cm、杆菌肽和磷酸盐缓冲溶液(PBS)分别与E型Ct标准株于室温下预孵育3h后接种至Hela细胞,同时设置Ct感染对照组.48 h后免疫荧光染色计数包涵体.多组样本均数间比较用单因素ANOVA分析,两样本均数间比较用Bonferroni检验.结果 成功表达并纯化出蛋白VP1Cm.在相同浓度时,PhiCPG1衣壳蛋白VP1、截短蛋白VP1C和蛋白VP1Cm对Ct的抑制率分别为76.20％、85.13％和90.01％.结论 经设计过的蛋白VP1Cm对Ct的抑制效果优于PhiCPG1衣壳蛋白VP1及其功能结构域截短蛋白VP1C.
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