【摘 要】
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目的 测定IFN-λ1在CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK等4种不同种属来源细胞中的抗病毒活性. 方法 利用RT-PCR技术从人结直肠腺癌细胞(CaCo2)中扩增获得人IFN-λ1 (HuIFN-λ1)基因,
【机 构】
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延边大学农学院,吉林延吉133000;军事医学研究院军事兽医研究所;延边大学农学院,吉林延吉,133000
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目的 测定IFN-λ1在CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK等4种不同种属来源细胞中的抗病毒活性. 方法 利用RT-PCR技术从人结直肠腺癌细胞(CaCo2)中扩增获得人IFN-λ1 (HuIFN-λ1)基因,然后克隆至真核表达载体pCDNA3.1-Flag-HA中,通过质粒转化、阳性菌落筛选、质粒提取及测序,获得重组质粒pCDNA3.1-HuIFN-λ1;利用脂质体将其转染293细胞,48 h后通过Western blot检测HuIFN-λ1瞬时表达情况,取转染后上清分别作用于CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK等四种不同种属来源细胞进行HuIFN-λ1抗病毒活性分析. 结果 从人结直肠腺癌细胞中扩增获得HuIFN-λ1基因,大小为600 bp,并在293细胞内成功表达HuIFN-λ1,表达产物能抑制VSVG在CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK中的增殖,流式细胞仪检测经HuIFN-λ1处理的上述细胞荧光率分别为73.69％、80.12％、71.73％、69.47％.结论 重组表达的人IFN-λ1蛋白对4种不同种属来源的细胞均存在一定的抗病毒活性,为研究人IFN-λ1在宿主抗病毒免疫和黏膜免疫中的作用机制及其应用奠定了基础.
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