CD133与磷脂酰肌醇3激酶p85相互作用促进胃癌细胞化疗耐药

• 作 者: 宋书铮 姜波健 吴巨钢 倪晓春 王守练 杜亚琼 俞继卫
• 机 构: 201999 上海交通大学医学院附属第九人民医院普外科,201999 上海交通大学医学院附属第九人民医院普外科,201999 上海交通大学医学院附属第九人民医院普外科,201999 上海交通大学医学院
• 出 处: 中华实验外科杂志
• 发表日期: 2017年34期
• 关键词: 胃癌 CD133 化疗耐药 磷脂酰肌醇3激酶p85

目的

构建稳定干扰及过表达CD133的胃癌细胞株，观察CD133分子对胃癌细胞化疗多药耐药能力的影响，并探讨其机制。

方法

使用慢病毒在KATOⅢ及MKN45中分别构建稳定干扰及过表达CD133细胞株；Western blot验证干扰及过表达效率。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)和顺铂(DDP)的敏感性，采用Western blot法检测耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的表达及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的激活，最后利用免疫沉淀技术检测CD133与p85之间的相互作用情况。

结果

与空载体组比较，干扰组或过表达组的CD133蛋白水平明显降低或升高。而相同药物浓度下，5-Fu和DDP对干扰组的抑制率明显高于对照组，其半数抑制浓度分别为[(54.030 0±0.647 9) μmol/L比(133.300 0±4.918 0) μmol/L，P＝0.005和(2.312 0±0.223 6) μmol/L比(24.590 0±2.159 0) μmol/L，P＝0.001]；而对过表达组的抑制率明显低于对照组，其半数抑制浓度分别为[(8.102 0±0.433 1) μmol/L比(2.217 0±0.132 4) μmol/L，P＝0.010和(24.487 0±2.132 0) μmol/L比(11.620 0±1.534 0) μmol/L，P＝0.030]。在稳定干扰CD133表达后，耐药相关因子P-gp、bcl-2和p-Akt的蛋白水平均显著降低，而促凋亡因子bax表达则显著升高；与之相反，过表达CD133后，P-gp、bcl-2和p-Akt的蛋白水平显著升高，而bax则明显降低。而用p85抗体进行免疫沉淀后，过表达组检测到CD133表达。

结论

CD133能够显著促进胃癌细胞的化疗耐药能力；而这可能是通过与磷酸肌醇3激酶(PI3K)的亚基p85相互作用进而激活PI3K/Akt信号通路实现的。