【摘 要】
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目的 建立分离、培养高纯度兔膀胱平滑肌细胞的方法,并进行细胞学鉴定与分析.方法 正常成年新西兰白兔共6只,运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后,完整分
【机 构】
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复旦大学附属中山医院泌尿外科,上海,200032
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目的 建立分离、培养高纯度兔膀胱平滑肌细胞的方法,并进行细胞学鉴定与分析.方法 正常成年新西兰白兔共6只,运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后,完整分离膀胱平滑肌层.然后以酶分离法获取兔膀胱平滑肌细胞,体外原代和传代培养分离细胞.在倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况,同时进行细胞爬片H-E染色和透射电镜等形态学观察分析,并应用免疫荧光染色平滑肌特有的α-肌动蛋白进行细胞学鉴定分析.最后根据细胞计数绘制细胞生长曲线和增殖曲线.结果 24 h可见膀胱平滑肌细胞贴壁生长,7 d可进行传代,传至第10代时细胞仍迅速生长.倒置显微镜下观察细胞相互交叉、重叠生长形成多层,高低起伏呈“谷和峰”样结构.至第12代时,细胞开始变形.至第15代时细胞已失去平滑肌细胞的典型形态特点,细胞生长杂乱且不规则.至第20代时细胞已死亡.以第4代细胞进行形态学细胞爬片H-E染色和透射电镜观察分析,以及平滑肌特有的α-肌动蛋白免疫荧光染色分析均证实,该分离培养的细胞为膀胱平滑肌细胞,且纯度高达100%.结论 酶分离法在短时间内成功培养大量高纯度的膀胱平滑肌细胞,为深人研究膀胱平滑肌细胞的病理生理及分子生物学奠定了基础.
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