【摘 要】
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目的探索一種有效的體外分離兔視網膜色素上皮(RPE)細胞的良好方法,并觀察RPE細胞凍存復蘇前後的形態學特黠.方法用兩步酶法分離兔RPE細胞,第一步酶(透明質酸酶+胰蛋白酶),用
【机 构】
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030001,中國山西醫科大學第一醫院眼科
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目的探索一種有效的體外分離兔視網膜色素上皮(RPE)細胞的良好方法,并觀察RPE細胞凍存復蘇前後的形態學特黠.方法用兩步酶法分離兔RPE細胞,第一步酶(透明質酸酶+胰蛋白酶),用于鬆解視網膜神經上皮細胞與RPE細胞之間的連接;第二步(胰蛋白酶)用于離散RPE細胞,制成細胞懸液;然後用慢凍速融方法對細胞進行冷凍保存及復蘇,最後用4種方法(RPE片層觀察、H-E染色、免疫組化法及光、電鏡觀察法)觀察RPE細胞在凍存前後的形態特點.結果用此方法分離培養的細胞其結構完整,純度高,收獲量多,在體外生長旺盛,達到鋪滿匯合的時間縮短,同時維持體内細胞的許多生物學和形態學特點.細胞凍存復蘇後的存活率高達80%左右,且與凍存前細胞形態相比未見明顯差别.結論此分離培養方法及凍存復蘇法是高效可行的.
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