比较3种富集结肠癌DLD－1细胞肿瘤干细胞的培养模型的效果。
方法用含不同浓度生长因子的无血清培养基分为3组悬浮培养DLD－1细胞获得细胞球，其中G1组方案：10 ng/mL上皮生长因子(EGF)＋10 ng/mL成纤维细胞生长因子(bFGF)；G2组方案：20 ng/mL EGF＋10 ng/mL bFGF；G3组方案：20 ng/mL EGF＋20 ng/mL bFGF。流式细胞术检测细胞球中CD133＋CD44＋、CD133＋、CD44＋、ALDH＋细胞比例变化；Real－time PCR检测细胞球中干细胞基因(Oct4、Sox2、Nanog)及CSCs基因(CD133、CD44、CD166、ALDH、CD66c)mRNA表达变化；成球实验检测细胞球自我更新能力变化；平板克隆形成实验检测细胞体外成瘤能力变化。正态分布的计量资料以
±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用配对样本t检验。
流式细胞术检测结果：G1组、G2组和G3组细胞中CD133＋CD44＋细胞比例分别为0.030±0.010、0.113±0.012、0.043±0.006，3组比较，差异有统计学意义(F＝67.625，P<0.05)；G2组中CD133＋CD44＋细胞比例分别与G1组和G3组比较，差异均有统计学意义(t＝9.449，12.124，P<0.05)；G1组与G3组比较，差异无统计学意义(t＝－4.000，P>0.05)。G1组、G2组和G3组细胞中CD133＋细胞比例分别为0.037±0.015、0.027±0.006、0.023±0.006，3组比较，差异无统计学意义(F＝1.444，P>0.05)。G1组、G2组和G3组细胞中CD44＋细胞比例分别为20.103±4.761、44.600±2.138、44.387±2.117，3组比较，差异有统计学意义(F＝56.269，P<0.05)；G1组中CD44＋细胞比例分别与G2组和G3组比较，差异均有统计学意义(t＝－10.024，－14.696，P<0.05)；G2组与G3组比较，差异无统计学意义(t＝0.131，P>0.05)。G1组、G2组和G3组细胞中ALDH＋细胞比例分别为0.060±0.010、0.627±0.068、0.043±0.021，3组比较，差异有统计学意义(F＝192.097，P<0.05)；G2组中ALDH＋细胞比例分别与G1组和G3组比较，差异均有统计学意义(t＝12.962，21.380，P<0.05)；G1组与G3组比较，差异无统计学意义(t＝2.500，P>0.05)。Real－time PCR检测结果：G1组、G2组和G3组干细胞基因Oct4、Sox2、Nanog及CSCs基因CD133、CD44、CD166、ALDH、CD66c mRNA表达分别为1.272±0.152、11.636±3.164、1.420±0.201，4.717±0.409、8.262±1.079、4.827±0.446，1.836±0.417、12.883±4.030、1.636±0.589，1.555±0.397、4.367±1.109、1.208±0.165，25.853±4.544、59.483±8.950、26.924±4.134，21.223±1.088、57.847±5.880、21.710±4.010，19.378±2.479、78.211±9.879、18.475±3.571，4.737±2.105、18.003±3.826、5.211±1.474；各组上述基因mRNA表达比较，差异有统计学意义(F＝31.529，23.865，21.557，19.102，27.837，76.608，90.530，23.997，P<0.05)。上述基因mRNA表达中，G2组分别与G1组和G3组比较，差异均有统计学意义(t＝5.950，8.997，5.257，5.507，5.766，9.158，11.507，6.730；5.428，7.782，4.340，5.583，4.979，6.829，7.937，8.445，P<0.05)；G1组与G3组比较，差异无统计学意义(t＝－0.797，－0.555，0.392，2.539，－1.004，－0.232，0.265，－0.675，P>0.05)。成球实验检测结果：G1组、G2组和G3组细胞球数分别为(182±34)个、(396±22)个、(217±22)个，3组比较，差异有统计学意义(F＝56.128，P<0.05)。G2组中细胞球数分别与G1组和G3组比较，差异均有统计学意义(t＝6.698，9.483，P<0.05)；G1组与G3组比较，差异无统计学意义(t＝－1.904，P>0.05)。平板克隆形成实验检测结果：G1组、G2组和G3组细胞体外形成克隆数分别为(230±33)个、(403±32)个、(266±36)个，3组比较，差异有统计学意义(F＝22.111，P<0.05)。G2组中细胞体外形成克隆数分别与G1组和G3组比较，差异均有统计学意义(t＝5.053，4.913，P<0.05)；G1组与G3组比较，差异无统计学意义(t＝－2.073，P>0.05)。
结论20 ng/mL EGF＋10 ng/mL bFGF方案更能有效富集结肠癌DLD－1细胞的肿瘤干细胞。