通过定点诱变法研究耐热碱性磷酸酯酶的活性位点,耐热性和亲热性

• 作 者: 季朝能 孙冰
• 机 构: 复旦大学生命科学院遗传所,遗传国家重点实验室
• 出 处: 遗传学报
• 发表日期: 2000年12期
• 关键词: 耐热碱性磷酸酯酶 定点诱变 热稳定性 亲热性 thermostablealkalinephosphatase site-directedmutagenes
• 基金项目: 国家自然科学基金项目!（批准号：39870402）

通过对耐热碱性磷酸酯酶ＴＡＰＮＤ２７活性位点Ｓ（６９）两侧的Ｅ（６８）和Ｓ（７０）的定点突变，得到了３个突变子Ｅ６８Ｓ、Ｓ７０Ａ和Ｅ６８ＳＳ７０Ａ。在蛋白纯化的基础上测定了３个变体的一些酶学性质，与ＴＡＰＮＤ２７相比，Ｅ６８Ｓ的比活力上升８倍，Ｔｍ下降了３℃，最适反应温度上升了２０℃；Ｓ７０Ａ的比活力上升了１部，Ｔｍ下降了２℃，最适反应温度上升了５℃；Ｅ６８ＳＳ７０Ａ的比活力下降了５０％，Ｔｍ下降