棉铃虫几丁质酶的系统分类及Ⅶ型几丁质酶表达与酶学性质分析

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昆虫几丁质酶(chitinase,CHT)主要参与蜕皮、围食膜的降解、细胞增殖和机体免疫防御等重要生理生长发育过程.本研究从NCBI下载棉铃虫(Helicoverpa armigera)及其他昆虫的几丁质酶氨基酸序列,分析结构域和构建系统进化树,结果表明,棉铃虫的6个几丁质酶分别属于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅶ、Ⅷ型几丁质酶,1个几丁质酶属新的类型(new group).到目前为止,Ⅶ型几丁质酶HaCHTⅦ研究较少,本研究克隆了HaCHTⅦ基因,在大肠杆菌(Escherichia coli) transetta(DE3)中表达和纯化了融合蛋白His-HaCHTⅦ,并测定了其对胶体几丁质和N一乙酰壳二糖底物的降解活性,结果表明,His-HaCHTⅦ对胶体几丁质没有降解活性,而对N-乙酰壳二糖具有降解活性,最适pH值和温度分别为7和25℃,动力学参数米氏常数(Km)和最大速率(Vmax)分别为0.486 2 mmol/L和2.715 1μg/(mL·min),说明HaCHTⅦ在棉铃虫体内可能将寡聚糖降解为N一乙酰基葡糖糖,为合成新的几丁质提供起始底物而参与昆虫的生长发育.本研究结果将有助于更好地理解棉铃虫Ⅶ型几丁质酶的功能,也为害虫防治提供有益的信息.
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