柱状黄杆菌双抗体夹心ELISA检测方法的建立

• 作 者: 吕娜 殷晓平 张虹茜 张懋岚 孙强 赵国坤 张捷
• 机 构: 浙江万里学院生物与环境学院,吉林农业大学食品科学与工程学院
• 出 处: 中国畜牧兽医
• 发表日期: 2014年3期
• 关键词: 柱状黄杆菌 双抗体夹心ELISA 单克隆抗体 Flavobacterium columnaris double antibody sandwich ELISA
• 基金项目: 2010年浙江省科技厅公益项目（2010C32066）,吉林农业大学博士科研启动基金（201308）.

为快速检测柱状黄杆菌，本研究以纯化的柱状黄杆菌单克隆抗体为捕获抗体，以多克隆抗体为检测抗体，建立了双抗体夹心ELISA（DAS-ELISA）检测法。最佳的方案为用0．08μg／孔纯化的单克隆抗体4℃包被过夜，30g／L牛血清白蛋白37℃封闭90rain，多克隆抗体的工作浓度为0．11μg／孔，检测抗原、多克隆抗体、酶标抗体均为37℃作用1h，显色15min后终止反应，当D492 nm值≥0．776且P／N≥2．1时判定为阳性。该方法特异性强，与迟钝爱德华氏菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、副溶