表达抗原Rv3478的重组卡介苗的实验研究

• 作 者: 孔聪 朱琳 粟海波 黄琪 李光华 宋娜 徐颖 王洪海
• 机 构: 200438 上海，复旦大学生命科学学院,200438 上海，复旦大学生命科学学院,200438 上海，复旦大学生命科学学院,200438 上海，复旦大学生命科学学院,200438 上海，复旦大学生命
• 出 处: 中华微生物学和免疫学杂志
• 发表日期: 2015年35期
• 关键词: 结核病 重组卡介苗 Rv3478 疫苗

目的

本研究选取结核杆菌优秀抗原Rv3478，构建重组疫苗rBCG：：Rv3478并对其进行免疫原性评价。

方法

PCR扩增基因Rv3478，构建重组质粒Rv3478-pMV261之后电转进入BCG感受态细胞中，另外将扩增的基因片段导入pET-28a中，构建表达载体Rv3478-pET-28a(BL21)表达蛋白Rv3478，蛋白免疫小鼠获取多克隆抗体，蛋白印迹方法筛选得到表达Rv3478的重组卡介苗；用构建好的重组卡介苗刺激巨噬细胞，收集细胞培养上清ELISA检测细胞因子的分泌；重组疫苗rBCG：：Rv3478(R3)免疫小鼠，PBS、BCG、BCG：：pMV261(R0)作对照组。分别在免疫4周和12周后处死小鼠，用ELISPOT、ELISA、流式细胞术等方法检测疫苗细胞免疫和体液免疫水平。

结果

成功表达蛋白Rv3478，免疫小鼠后获得多克隆抗体；成功构建重组疫苗R3；免疫小鼠后，能够引发强烈的细胞免疫应答(强烈的IFN-γ反应，高水平的TNF-α的分泌)，促进外周血CD4^＋/CD8^＋T细胞比例增加，CD44^＋CD62L^＋T细胞百分比增加。

结论

构建的重组疫苗R3能够引发强烈的免疫应答，显示出良好的免疫原性，具有良好的抗结核潜力，值得进一步研究。