【摘 要】
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目的:本文旨在探讨miR-125b-5p对BCG介导的细胞自噬途径的调控及巨噬细胞内BCG存活的影响及其可能的作用机制。方法:采用卡介苗菌株BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,用RT-PCR检
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目的:本文旨在探讨miR-125b-5p对BCG介导的细胞自噬途径的调控及巨噬细胞内BCG存活的影响及其可能的作用机制。方法:采用卡介苗菌株BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,用RT-PCR检测miR-125b-5p的表达量。Western blot检测DRAM2及自噬相关蛋白表达水平。菌落形成单位(CFU)计数检测BCG生存率。通过生物信息学软件预测miR-125b-5p的靶基因。利用双萤光素酶报告系统、RT-PCR及Western blot法验证miR-125b-5p与DRAM2的靶向作用关系。结果:BCG感染的巨噬细胞RAW264.7中miR-125b-5p的表达明显上调,且呈时间依赖性。另外,miR-125b-5p过表达明显下调巨噬细胞中LC3-Ⅱ表达量,同时上调p62的表达水平,从而降低细胞的自噬水平。此外,过表达miR-125b-5p通过负性调控自噬过程增加胞内BCG的存活率。生物信息学分析表明DRAM2是miR-125b-5p的靶基因。双荧光素酶报告系统结果验证miR-125b-5p可明显抑制DRAM2的相对荧光素酶活性。RT-PCR及Western blot法证实miR-125b-5p可靶向作用于DRAM2-3′-UTR并抑制其表达。结论:BCG感染巨噬细胞RAW264.7后,可使miR-125b-5p表达明显上调,通过靶向抑制DRAM2的表达,从而参与调控巨噬细胞RAW264.7的自噬途径,继而影响BCG在细胞内的存活,这可能是MTB的潜伏感染的机制之一。
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