【摘 要】
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目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(
【机 构】
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哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室,哈尔滨医科大学黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地,哈尔滨医科大学药物与内源性物质代谢省高校重点实验室,
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目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠制备(mAb),用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot、免疫荧光鉴定其特异性及免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。结果:CD20-GST和CD20-His蛋白在大肠杆菌中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的CD20蛋白,经细胞融合得到1株稳定分泌CD20抗体的杂交瘤细胞株,Western blot和免疫组化显示抗CD20mAb与CD20蛋白具有良好的反应性。结论:成功制备高纯度CD20蛋白并以此为抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的鼠mAb的杂交瘤细胞株BD11F4,为进一步研究CD20对非霍奇金淋巴瘤的诊断治疗提供基础。
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