【摘 要】
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目的:基于网络药理学与分子对接技术预测青黄散治疗急性髓系白血病(AML)的潜在活性靶点与信号通路,通过体外细胞实验进一步验证其作用机制.方法:基于中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医药综合数据库(TCMID)、TargetNet、SwissTargetPrediction数据库获取青黄散活性成分和作用靶点;通过DrugBank、DisGeNET、GeneCards、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)获取AML疾病相关靶点.筛选出青黄散与AML的共同靶点后,使用STRING数据库进行蛋白质-
【机 构】
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江西中医药大学附属医院,南昌330006
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目的:基于网络药理学与分子对接技术预测青黄散治疗急性髓系白血病(AML)的潜在活性靶点与信号通路,通过体外细胞实验进一步验证其作用机制.方法:基于中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医药综合数据库(TCMID)、TargetNet、SwissTargetPrediction数据库获取青黄散活性成分和作用靶点;通过DrugBank、DisGeNET、GeneCards、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)获取AML疾病相关靶点.筛选出青黄散与AML的共同靶点后,使用STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用网络分析,并通过RStudio软件使用R语言及clusterProfiler、Bioconductor等包进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.同时应用Cytoscape软件进行“疾病-药物成分-靶点”与“化合物-靶点-通路”网络的构建.选取青黄散活性成分与“化合物-靶点-通路”网络排名前8个靶点进行分子对接.利用体外细胞实验及蛋白免疫印迹法(Western blot)进一步验证青黄散抗AML作用.结果:预测结果显示青黄散主要活性成分11个,收集青黄散与AML的共同靶点22个;KEGG通路分析结果显示磷脂酰肌醇3-激酶(P13K)/蛋白激酶B(Akt)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路可能在青黄散治疗AML疾病中起到关键作用.“化合物-靶点-通路”网络分析显示排名前8的靶点包括Akt1、磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α(PIK3CA)、双特异性丝裂原活化蛋白激酶1(MAP2K1)、凋亡相关基因(TP53)、原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶1(RAF1)、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)和原癌基因(JUN).分子对接结果表明3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷与MAP2K1、异牡荆素与PIK3CA、靛玉红与Bcl-2对接最优.细胞实验表明3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷、异牡荆素和靛玉红可有效抑制AML细胞增殖,并调控MAPK/PI3K信号通路,抑制Bcl-2蛋白的表达.结论:青黄散可通过多成分.多靶点-多途径方式协同作用治疗AML,其作用机制可能与调控MAPK信号通路及PI3K/Akt信号通路有关.
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