【摘 要】
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目的:研究丹酚酸A对棕榈酸诱导的A ML12肝细胞脂毒性的保护作用并初步探究其分子机制.方法:采用棕榈酸诱导A ML12细胞建立脂毒性模型并给予丹酚酸A进行干预,采用乳酸脱氢酶(L
【机 构】
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浙江中医药大学 生命科学学院,杭州310053 ,浙江;宁波市中医院 消化内科,宁波310000 ,浙江;浙江中医药大学 分子医学研究所,杭州310053 ,浙江;浙江中医药大学 基础医学院、公共卫生
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目的:研究丹酚酸A对棕榈酸诱导的A ML12肝细胞脂毒性的保护作用并初步探究其分子机制.方法:采用棕榈酸诱导A ML12细胞建立脂毒性模型并给予丹酚酸A进行干预,采用乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤,采用酶法检测细胞内甘油三酯含量,采用Bodipy染色法观察胞内的脂滴,采用甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞存活率,采用荧光细胞通透性染料罗丹明123和荧光显微镜检测线粒体膜电位.采用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)和荧光显微镜检测细胞内活性氧(ROS)水平.采用Western blot技术检测沉默信息调节因子相关酶Ⅰ(silent information regulator 1,SIRT1)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)蛋白表达.结果:棕榈酸作为肝细胞脂毒性诱导剂可显著降低A ML12细胞存活率,加重细胞内脂质沉积,而丹酚酸A干预可改善棕榈酸诱导的肝细胞脂毒性损伤(P<0.05).其次,丹酚酸A干预可改善棕榈酸诱导的细胞线粒体膜电位降低(P<0.01)及细胞内ROS水平升高(P<0.01).此外,Western blot结果显示棕榈酸可显著抑制AMPK及SIRT1蛋白表达(P<0.05),而经过丹酚酸A处理可显著升高棕榈酸抑制的SIRT1及AMPK磷酸化水平(P<0.05).结论:丹酚酸A可有效改善脂毒性诱导的肝细胞损伤,该保护作用可能与其激活AMPK及SIRT1蛋白有关.
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