GL—7—ACA酰化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作 者: 杨蕴刘 恽定芳 关颖谦 彭惠林 陈剑民 何云生 焦瑞身
• 机 构: 中国科学院上海植物生理研究所
• 出 处: 生物工程学报
• 发表日期: 1991年2期
• 关键词: 7-ACA酰化酶 基因克隆 基因表达 Gene cloningGL-7-ACA acylase7-ACA

本文报道了利用BamHI酶解的载体pBR322 DNA与Sau3A部分酶解的假单胞菌Ps.130染色体DNA片段构建重组质粒,并用~(32)P标记的寡核苷酸探针从3205个含有外源片段的重组质粒中检测得到7株阳性克隆株。进一步经~(125)I一标记的抗体/抗原放射免疫反应、GL-7-ACA酰化酶活力测定以及酶反应产物的纸谱色层分析,由上述7株阳性株中鉴定出3株能在大肠杆菌中表达酰化酶活力的基因克隆株。对该3株菌的重组质粒——pMR 5、pMR 6和pMR7 DNA的初步凝胶电泳分析表明,pMR 5和pMR