论文部分内容阅读
目的
探讨溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)对乳腺癌细胞分子伴侣介导自噬(CMA)的作用及机制,以及对阿霉素敏感性的影响。
方法使用小分子干扰RNA敲除以及质粒DNA过表达乳腺癌细胞中的LAMP2A。Western blot法检测蛋白水平的变化,Cell Titer-Glo发光法检测细胞活性,2’,7’-二氯氢化荧光素乙二脂(DCF-DA)染色法结合荧光酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡。
结果过表达乳腺癌细胞LAMP2A后CMA活性、细胞生存能力升高,MCF-7与T47D细胞系中敲除或过表达LAMP2A后,与对照组相比,CMA活性、细胞生存能力在300 nmol/L时差异最明显[(70.0±2.1)%比(52.0± 1.8)%、(54.0±3.4)%比(76.0±1.5)%;(62.4±1.9)比(50.0±3.2)%、(60.0±1.1)%比(72.0± 1.8)%,P<0.05]。敲除或过表达LAMP2A后,在T47D和MCF-7细胞中的ROS水平(0.89± 0.32比1.11±0.41;1.00±0.00比1.37±0.24)、细胞凋亡(2.10±0.52比1.59±0.38;0.91± 0.12比1.37±0.24)及对阿霉素的敏感性增加(84.33±3.20比54.73±2.90)或降低(82.70±3.70 比53.90±2.30,P< 0.05)。
结论LAMP2A能够诱导乳腺癌细胞的分子伴侣介导的自噬并影响对阿霉素的敏感性。