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目的
观察大黄素对前列腺癌细胞凋亡及凋亡诱导因子(AIF)和核酸内切酶G (Endo G)表达的影响,探讨大黄素的非半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)依赖细胞凋亡途径。
方法实验分空白对照组、大黄素组、Caspase抑制剂干预组、大黄素+ Caspase抑制剂组,噻唑蓝(MTT)法筛选大黄素的干预条件;流式细胞术检测干预后前列腺癌细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot法检测AIF、Endo G m RNA及蛋白表达。
结果EM浓度在20μmol/L以上能显著抑制前列腺癌细胞株的增殖,其作用呈剂量与时间依赖性。当EM浓度为160μmol/L时,48、96 h细胞抑制率分别为(59. 76±3. 90)%和(71. 77±3. 50)%。EM能显著增加前列腺癌细胞凋亡率,与对照组相比差异有统计学意义[(22. 54±2. 32)%比(4. 54±1. 26)%,P< 0. 05];与EM单独干预比较,EM+ Caspase-3抑制剂干预后凋亡率虽然有所下降,但仍显著高于空白对照组[(15. 65±1. 84)%比(4. 54±1. 26)%,P< 0. 05]。Real-time PCR及Western blot检测结果显示,与空白对照组比较,EM及EM+ Caspase抑制剂均可显著增加AIF、EndoG m RNA及蛋白表达(P< 0. 05)。
结论大黄素可上调前列腺癌细胞AIF、Endo G表达,通过非Caspase依赖通路而发挥促凋亡的作用。