【摘 要】
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目的 通过昆虫杆状病毒表达系统获得具有良好免疫原性的流感病毒蛋白.方法 将Hemagglutinin[In-fluenza A virus(A/California/09/2009(H1N1))进行截短,取57-271球状头部结构
【机 构】
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扬州大学兽医学院,江苏扬州225100;军事医学研究院军事兽医研究所;军事医学研究院军事兽医研究所;吉林大学动物医学学院;军事医学研究院军事兽医研究所;扬州大学兽医学院,江苏扬州225100
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目的 通过昆虫杆状病毒表达系统获得具有良好免疫原性的流感病毒蛋白.方法 将Hemagglutinin[In-fluenza A virus(A/California/09/2009(H1N1))进行截短,取57-271球状头部结构域氨基酸序列,在前面加Igκ leader信号肽(METDTLLLWVLLLWVPGSTGD),设计H1HAHead基因.将基因序列按照昆虫细胞密码子偏好性进行优化、合成,通过EcoRI和HindⅢ双酶切克隆至pFastBAC HTA载体上,获得含有目的基因的重组质粒pFastBAC HTA-H1HAHead.利用热激法将重组质粒转化至大肠埃希菌DH10 BacTM感受态细胞,蓝白斑筛选获得重组杆状质粒rBac-mid-H1HAHead.在脂质体的介导下,将重组杆状质粒转染至SF9细胞,对病毒进行拯救,转染后120 h,收取上清病毒液,盲传3代,获得SF9细胞,运用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot检测目的蛋白的表达.结果 经双酶切鉴定成功插入长度为762 bp的目的基因H1HAHead,通过脂质体介导长度为3 192 bp的重组杆状质粒rBacmid-H1HAHead构建成功.杆状病毒系统可表达目的蛋白,其分子质量单位28.25 ku,与预期一致.Western blot鉴定该蛋白能与特异性标签His-tag发生反应,IFA鉴定感染重组病毒的SF9细胞外源蛋白表达.结论 通过昆虫杆状病毒表达系统成功表达目的蛋白,该蛋白有反应性,为流感抗体检测和新型疫苗的开发奠定了基础.
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