【摘 要】
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[目的]克隆刚地弓形虫Prx基因,用IPTG诱导表达Prx融合蛋白并进行纯化.[方法]用PCR扩增目的基因片段并克隆至pGEX-6P-1载体,构建pGEX-6p-1/TgPrx原核表达载体;IPTG诱导表达Prx
【机 构】
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徐州医学院病原生物与免疫学教研室,江苏徐州,221002
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[目的]克隆刚地弓形虫Prx基因,用IPTG诱导表达Prx融合蛋白并进行纯化.[方法]用PCR扩增目的基因片段并克隆至pGEX-6P-1载体,构建pGEX-6p-1/TgPrx原核表达载体;IPTG诱导表达Prx融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,GST亲和层析纯化融合蛋白.[结果]从弓形虫RH株DNA中扩增Prx基因,成功构建了弓形虫重组质粒pGEX-6p-1/TgPrx,并在大肠埃希菌(E.coli)中得到高效表达,表达的融合蛋白分子质量为51ku,该蛋白可被鼠抗弓形虫血清特异性识别.[结论]原核表达具有生物学活性的弓形虫重组Prx蛋白(rTgPrx),该蛋白有望用于弓形虫病免疫学检测.
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