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[英]/Nishikawa T…//Nature.-2000，404.-787-790rn 高血糖通过诱导蛋白激酶C(PKC)活化、糖基化终产物(AGEs)形成以及山梨醇在细胞内积聚而参与糖尿病性血管病变的发生，而高血糖亦可导致血管内皮细胞反应性氧类(reactiveoxygenspecies,ROS)增多。本研究旨在揭示高血糖所致的血管内皮细胞ROS增多是否为上述三条主要途径活化引发糖尿病性微血管病变的共同机制。rn 材料与方法 培养牛主动脉内皮细胞，培养液中分别加入5mmol/L、30mmol/L葡萄糖(Glu)、30mmol/LGlu＋100μmol/L氨羟乙酸(AOAC，苹果酸-天冬氨酸穿梭阻断剂)、250μmol/Lα-氰-4羟苯基丙-2-烯酸(4-OHCA，抑制丙酮酸转入线粒体)、5μmol/L鱼藤酮(复合体I抑制剂)、10μmol/L噻吩甲酰三氟丙酮(TTFA，复合体II抑制剂)、0.5μmol/Lα-羰基氰化氯苯腙(CCCP，氧化磷酸化的解偶联剂)、解偶联蛋白(UCP)1或Mn过氧化物歧化酶(Mn-SOD)HVJ脂质体。用CM-H2DCFDA荧光探针(分子探针)测定细胞内ROS的含量；用放射性同位素(U-14C)法测定经三羧酸(TCA)循环及糖酵解的Glu量；单克隆抗体1H7G5测甲基乙二醛源性咪唑AGEs；气相色谱法测醛糖还原酶(AR)活性；电泳迁移率分析NFκB活性；统计学处理采用单因素方差分析及Tukey-Kramer多重比较。rn 结果 30mmol/LGlu组ROS生成增多，AOAC不能阻断高血糖所致ROS的增多(P<0.01)，而4-OHCA可完全阻断(P<0.01)；30mmol/LGlu组经TCA循环的Glu比5mmol/LGlu组增加2.2倍；鱼藤酮不能抑制高血糖所致ROS的增多，而TTFA、CCCP虽可完全阻断(P<0.01)，但不能降低糖酵解中Glu流量，过表达UCP1、Mn-SOD均可阻断高血糖所致ROS的增多，而用同样载体携带UCP1的反义cDNA入内皮细胞中却无此作用(P均<0.01)；30mmol/L组的山梨醇水平比5mmol/L组的高2.6倍，但两组胞内山梨醇积聚均可完全被AR特异性抑制剂zopolrestat所抑制；30mmol/L组NFkB活性比5mmol/L增加1.8倍；TTFA、CCCP、UCP1和Mn-SOD均可完全抑制高血糖诱导的PKC活化、甲基乙二醛源性咪唑AGEs形成以及NFκB活化(P均<0.01)；TTFA、UCP1和Mn-SOD可完全抑制30mmol/L组的山梨醇积聚(P均<0.01)。rn 结论 研究表明，线粒体电子传递链过程中过氧化物生成的增多是高血糖诱导的导致机体损伤三条主要途径的共同机制。因此，抑制高血糖诱导的线粒体过氧化物过多生成，或歧化已生成的过氧化物，均将有助于预防糖尿病微血管并发症的发生、发展。rn(姜宏卫 程 洁摘 董砚虎校)