大黄酸对葡萄糖转运蛋白I基因转染系膜细胞功能的影响

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目的 通过观察大黄酸对葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因转染系膜细胞(MCGT1)功能的影响,探讨大黄酸治疗糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法 利用逆转录病毒载体建立GLUT1基因转染的大鼠系膜细胞,以β-半乳糖苷酶转染细胞(MCLacZ)为对照。用2-脱氧-3H-葡萄糖(2-DG)测定细胞葡萄糖摄入,流式细胞仪分析细胞表型,3H-脯氨酸掺入和流式细胞仪分别检测细胞胶原和纤维连接蛋白(FN)的合成,采用比色法测定谷氨酰胺:6-磷酸果糖转氨酶(GFAT)的活性,RT-PCR检测细胞胶原Ⅳ、FN和GFAT的表达。结果 MCGT1的2-DG摄入率明显高于MCLacZ[(741±60.5)dpm·μgprot-1比(92.2±9)dpm·μgprot-1],同时表现出细胞大小、RNA/DNA和蛋白/DNA明显增加的细胞肥大表型,细胞外基质合成增加,MCGT1的3H-脯氨酸掺入量明显高于MCLacZ[(7.0±0.4)dpm·cell-1比(4.6±0.6)dpm·cell-1],GFAT活性明显增强(约增加1.8倍)。大黄酸能够减少MCGT1的糖摄取[(560±64)dpm·μgprot-1比(741±60.5)dpm·μgprot-1),纠正MCGT1的肥大状态,并抑制MCGT1细胞外基质的合成和表达,降低MCGT1的GFAT活性。结论 GLUT1的过度表达会明显改变系膜细胞的功能,大黄酸能逆转GLUT1基因转染所致系膜细胞功能的改变。

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