论文部分内容阅读
目的 观察西罗莫司对体外培养的大鼠平滑肌细胞胶原合成以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达的影响.方法 体外组织贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,免疫组化胞质α-肌动蛋白染色鉴定,取对数生长期细胞进行实验.实验细胞依据西罗莫司不同作用浓度分为5组,西罗莫司终浓度分别为100、10、1、0.1、0 ng/ml(对照组).每组细胞接种后经同步化,按实验设计进行药物干预,作用24 h后加入3H标记的左旋脯氨酸共同培养12 h,收取细胞,加入闪烁液,于液体闪烁计数器中测定L-3H脯氨酸的掺入量(cpm值).并用RT-PCR法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的表达,以GAPDH作为内参照,产物明胶电泳后紫外光下成像,用校正后光密度值进行统计分析.结果 西罗莫司能够显著抑制平滑肌细胞胶原合成,呈浓度依赖性,L-3H脯氨酸掺入值经方差分析各浓度组间差异有统计学意义,F=18.936,P＜0.001.两两比较单侧t检验1 ng/ml以上组同对照组相比差异均有统计学意义(均P＜0.001).RT-PCR产物电泳图像分析结果显示Ⅰ型胶原mRNA的表达各浓度组间差异有统计学意义(F=13.244,P＜0.001),但Ⅲ型胶原mRNA的表达在各浓度组间差异无统计学意义(F=2.409,P=0.070).结论 西罗莫司能够剂量依赖性抑制平滑肌细胞胶原合成以及Ⅰ型胶原mRNA的表达,但对Ⅲ型胶原mRNA的表达影响不显著。