【摘 要】
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目的:人源化抗人纤维蛋白单链抗体,降低人抗鼠抗体反应.方法:从人免疫球蛋白基因数据库中挑选到与鼠源抗人纤维蛋白单链抗体scFv-8E5重链(VH-8E5)和轻链(VL-8E5)同源性最高的
【机 构】
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中国协和医科大学中国医学科学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室
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目的:人源化抗人纤维蛋白单链抗体,降低人抗鼠抗体反应.方法:从人免疫球蛋白基因数据库中挑选到与鼠源抗人纤维蛋白单链抗体scFv-8E5重链(VH-8E5)和轻链(VL-8E5)同源性最高的序列,作为人源化改造的框架,其中植入scFv-8E5的互补决定区.人工合成其DNA片段,用DNA连接酶连接成完整的人源化VH-8E5和VL-8E5,构建表达载体,转化JM109后用IPTG诱导表达,ELISA测定其抗原结合活性.结果:表达产物分子量30 kD左右,人源化scFv-8E5与亲本抗体scFv-8E5抗原结合活性无明显差别,可耐受至少2 w,4℃保存,数次反复冰融或一定时间的37℃孵育.结论:人源化scFv-8E5具有特异性识别人纤维蛋白的活性,鼠源scFv-8E5的人源化基本获得成功.
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