【摘 要】
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目的 观察SIRT1在小鼠肾脏发育过程中的表达变化及SIRT1基因敲除对小鼠肾脏发育的影响,探讨SIRT1在小鼠肾脏发育过程中的作用.方法 应用基因型分型方法观察SIRT1敲除后对小鼠
【机 构】
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复旦大学附属华山医院肾内科复旦大学肾脏病研究所,上海,200040
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目的 观察SIRT1在小鼠肾脏发育过程中的表达变化及SIRT1基因敲除对小鼠肾脏发育的影响,探讨SIRT1在小鼠肾脏发育过程中的作用.方法 应用基因型分型方法观察SIRT1敲除后对小鼠生存率的影响;应用免疫组化和免疫荧光技术检测胚龄14 d小鼠肾脏中SIRT1蛋白的表达部位;应用实时定量PCR对胚龄15d、16 d、17d、18d和出生后日龄0d、5d、9d、23 d小鼠肾脏组织中SIRT1 mRNA表达水平进行半定量分析;观察SIRT1敲除对胚龄17d、18d和出生后4d、10 d小鼠肾脏大小的影响;离体肾脏培养观察SIRT1敲除后对肾脏输尿管芽分支的影响;应用免疫组化、实时定量PCR技术观察SIRT1敲除后对小鼠肾脏增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平的影响.结果 大多数SIRT1(-/-)小鼠在孕期可以存活,出生后不久死亡;免疫组化及免疫荧光染色结果显示SIRT1在肾脏发育早期即有丰富表达,主要表达在后肾间充质部位,输尿管芽部位表达较少;实时定量PCR结果显示SIRT1在胚龄17 d表达水平最高,随后明显下降,在出生后维持低水平表达;SIRT1敲除后肾脏体积减小,镜下主要表现为肾小球数目减少以及肾小球面积减小(P＜ 0.01);SIRT1敲除后肾脏输尿管芽分支数目明显减少,PCNA表达水平明显下降(P＜0.01).结论 SIRT1可能通过调控PCNA表达在小鼠肾脏发育过程中对肾单位发育起重要作用.
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