目的 探讨DJ-1蛋白在原代培养的人黑素细胞中的表达以及抵抗H2O2诱导的氧化应激作用.方法 免疫荧光方法鉴定DJ-1在原代培养黑素细胞中的表达；使用不同浓度H2O2处理黑素细胞24h,改良MTT法选取适宜H2O2浓度为后续实验条件；Western印迹检测H2O2处理组细胞内DJ-1表达变化；采用反向转染方法,实验分为空白对照组(不含siRNA片段)、阴性对照组(转染非特异性siRNA)和实验组(转染DJ-1特异性siRNA).光学显微镜观察细胞贴壁后形态学差异；改良MTT法、荧光探针2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)、膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinⅤ-FITC/PI)分别检测H2O2处理后细胞活力变化、细胞内活性氧(ROS)水平及凋亡比例.结果 免疫荧光显示DJ-1在黑素细胞细胞核和胞质中均表达,以细胞核表达为主；细胞活力随H2O2浓度增高呈剂量依赖关系下降,与对照组比较,0.5 mmol/L H2O2处理24h后,细胞活力开始下降(P＜0.05).做诱导氧化应激的实验条件；Western印迹结果显示,0.5 mmol/L H2O2处理细胞24h后,DJ-1表达增高为H2O2未处理组的2.23倍(P＜0.05).干涉DJ-1表达后,实验组黑素细胞形态与空白对照组相比,树突减少缩短,胞质空泡化改变.使用0.5 mmol/L H2O2处理24h后,siRNA-DJ-1组细胞活力为对照组的35％(P＜0.05).细胞内ROS的荧光密度值(FI)值(902±40)和凋亡比例(58％±6.1％)增高,与空白对照组细胞内ROS的FI值(529±32)和凋亡比例(30％±3.8％)相比,P值均＜0.05.结论 DJ-1在黑素细胞中能够通过降低细胞内ROS 水平和抑制细胞凋亡,从而抵抗H2O2所诱导的氧化应激。
DJ-1降低细胞内ROS并抑制细胞凋亡保护黑素细胞抵抗H2O2诱导的氧化应激
【摘 要】
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目的 探讨DJ-1蛋白在原代培养的人黑素细胞中的表达以及抵抗H2O2诱导的氧化应激作用.方法 免疫荧光方法鉴定DJ-1在原代培养黑素细胞中的表达；使用不同浓度H2O2处理黑素细胞24h,改良MTT法选取适宜H2O2浓度为后续实验条件；Western印迹检测H2O2处理组细胞内DJ-1表达变化；采用反向转染方法,实验分为空白对照组(不含siRNA片段)、阴性对照组(转染非特异性siRNA)和实验组(
【机 构】
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710032西安,第四军医大学西京医院全军皮肤病研究所,710032西安,第四军医大学西京医院全军皮肤病研究所,710032西安,第四军医大学西京医院全军皮肤病研究所,710032西安,第四军医大学西
【出 处】
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中华皮肤科杂志
【发表日期】
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2011年44期
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