【摘 要】
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目的:观察自噬在乌头碱诱导H9C2心肌细胞凋亡中的作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法:以0.05%、0.1%、0.2%、0.4%浓度的乌头碱分别对H9C2心肌细胞作用30、60、90、180 mi
【机 构】
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成都中医药大学; 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地;
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目的:观察自噬在乌头碱诱导H9C2心肌细胞凋亡中的作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法:以0.05%、0.1%、0.2%、0.4%浓度的乌头碱分别对H9C2心肌细胞作用30、60、90、180 min,采用MTT法测定乌头碱对H9C2心肌细胞的增殖抑制作用;0.05%乌头碱作用H9C2心肌细胞不同时间后,应用MDC荧光染色观察自噬的发生,Hoechst/PI荧光双染观察凋亡的发生;并通过western blot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的变化。结果:乌头碱对H9C2心肌细胞增殖有显著的抑制作用,且此作用呈时间、剂量依赖关系;MDC荧光染色和Hoechst 33342/PI双染检测结果显示乌头碱给药后可诱导H9C2心肌细胞发生自噬和凋亡;western blot检测结果显示,自噬特异性蛋白LC3和Beclin-1被激活,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达升高。用3-MA抑制自噬后,可下调LC3、Beclin-1、Bcl-2蛋白表达,增加Bax蛋白表达。结论:乌头碱能抑制H9C2心肌细胞的生长,并诱导其发生自噬和凋亡,此过程中自噬和凋亡可能为拮抗作用,3-MA特异性抑制自噬后可增加乌头碱诱导的H9C2心肌细胞凋亡。
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