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摘 要：本试验目的在于研究多种不同饲料添加剂类抗生素对产气荚膜梭菌的抑菌试验，筛选出对产气荚膜梭菌抑菌效果强的药物，为饲料、养殖业临床上控制产气荚膜梭菌提供理论依据。试验选用喹乙醇、4 %恩拉霉素、盐霉素、硫酸黏霉素、15 %杆菌肽锌、黄霉素、吉他霉素和盐酸金霉素八种饲料常用抗生素添加剂，采用试管稀释法对猪源产气荚膜梭菌野毒株进行抑菌试验。
试验结果表明：（1）恩拉霉素抑菌作用最强，其MIC为1.6 μg/mL；（2）喹乙醇和15 %杆菌肽锌抑菌作用较强，它们的MIC分别为4 μg/mL和6 μg/mL；（3）黄霉素、硫酸黏霉素、吉他霉素抑菌作用较弱，它们的MIC分别为40 μg/mL、200 μg/mL、300 μg/mL；（4）盐霉素及盐酸金霉素对该产气荚膜梭菌野毒株几乎没有抑菌作用。由以上八种抗生素对产气荚膜梭菌的抑菌试验结果得出，八种抗生素对该产气荚膜梭菌野毒株均有不同程度的抑菌作用，而恩拉霉素对产气荚膜梭菌抑菌效果最强。
关键词：饲料添加剂类抗生素；猪源产气荚膜梭菌野毒株；抑菌试验；最低抑菌浓度（MIC）
中图分类号：S852.61 6.3 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2015）11-0046-02
产气荚膜梭菌（Clostridium Perfringens）是一种革兰氏阳性的专性厌氧杆菌，因其能形成芽孢的特性，故能够存在于猪的生态系统中[1]。在自然界也分布极广，可见于土壤、污水、饲料、食物、粪便以及动物肠道等中，也是动物肠道的正常菌群之一[2]。
产气荚膜梭菌致病作用主要在于它所产生的毒素，目前依据该菌能产生四种不同的主要毒素，将其分为A、B、C、D和E五个型[3]。而引起猪气性坏疽、肠毒血症和坏死性肠炎，主要是A型或C型产气荚膜梭菌[2]。A型产气荚膜梭菌感染率非常高，Gloria等在2011年調查48个猪场中产气荚膜梭菌流行情况中得出，87.5 %（42/48）的猪场存在A型产气荚膜梭菌感染[4]。Abdolvahab等在研究46头仔猪产气荚膜梭菌后得出，A型产气荚膜梭菌感染率100 %[5]。由于产气荚膜梭菌是一种条件性致病菌，一般情况下不发病，但在饲养管理不良、卫生条件差等不利条件下，动物肠道内环境菌群紊乱，很容易引起产气荚膜梭菌的大量繁殖产生毒素，进而导致产气荚膜梭菌性疾病发生[6，7]。该菌导致的猪猝死症发病急、病程短、死亡率高，为了减少产气荚膜梭菌给养殖业带来的损失，应加强疾病预防。本实验从江西万年县分离出一株产气荚膜梭菌，针对性地对江西地区的产气荚膜梭菌进行饲料添加剂的抑菌实验，故选用了多种饲料添加剂类抗生素对产气荚膜梭菌进行抑菌效果比较，研究出抑菌效果比较好的抗生素饲料添加剂，为饲料、养殖业临床应用提供一些理论依据。
1 材料和方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验菌株
由本实验室在江西万年县于2015年，从1～7日龄腹泻仔猪分离、鉴定和保存的A型产气荚膜梭菌。
1.1.2 培养基
液体硫乙醇酸盐培养基（FTG）、胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸（TSC）琼脂，均购置南昌万特科技有限公司。
1.1.3 试验药物（表1）
1.2 试验方法
1.2.1 试验药物的处理
根据兽药质量标准，对上述4 %恩拉霉素等八种药物进行处理，对药物进行溶解后于-20 ℃保存备用。
1.2.2 产气荚膜梭菌的准备
将保存的菌于TSC琼脂划线复苏，挑单个黑色菌落至10 mL FTG液体培养基中，37 ℃厌氧培养10 h后，用灭菌FTG培养基稀释到0.5麦氏比浊管（1×106 CFU/mL）浓度，待用。
1.2.3 采用试管稀释法测定八种药物的最低抑菌浓度
预实验确定各种药物最低抑菌浓度（MIC）范围，将处理好的药物用灭菌水进行倍比稀释，与A型产气荚膜梭菌分别加入FTG液体培养基中，使各种药物在试管中的终浓度如表2，将试验试管于37 ℃中培养24 h，通过肉眼观察细菌生长情况。试验结束后，如试管中的溶液澄清透明，说明没有细菌生长；如试管中有絮状细菌或混浊，说明有细菌生长。通过细菌是否生长来判定药物的MIC。
2 结果
（1） 4 %恩拉霉素对A型产气夹膜梭菌的抑菌试验结果如图1。
从图1可以看出1～3号试管中的溶液澄清透明，说明没有细菌生长；5号试管中的溶液有絮状物，6～7号试管浑浊，说明有细菌生长。因此，本试验中恩拉霉素对产气荚膜梭菌最小抑菌浓度（MIC）为1.6 μg/mL。
（2） 八种药物对A型产气荚膜梭菌野毒株的抑菌结果见表3。
3 结论
猪产气荚膜梭菌病主要是由A或C型产气荚膜梭菌引起的一种传染病，该病主要发生在1～7日龄新生仔猪，引起仔猪腹泻，发病急、病程短、死亡率高[8]。产气荚膜梭菌是一种条件性致病菌，鉴于产气荚膜梭菌的高感染率，实验选取八种常用饲料添加剂类抗生素，对其进行抑菌试验得出MIC，为预防产气荚膜梭菌性疾病提供参考依据，并减少养殖业损失。
由本试验结果得出，八种抗生素对A型产气荚膜梭菌野毒株均有不同程度的抑菌作用，其中以恩拉霉素抑菌作用最强，其MIC为1.6 μg/mL；其次为喹乙醇和15 %杆菌肽锌，他们的 MIC分别为4 μg/mL和6 μg/mL；最后黄霉素、硫酸黏霉素、吉他霉素抑菌作用较弱，他们的MIC分别为40 μg/mL、200 μg/mL、300 μg/mL；而盐霉素和盐酸金霉素对该A型产气荚膜梭菌野毒株几乎没有抑制作用。邹君彪[9]曾做过不同抗生素对产气荚膜梭菌抑菌试验研究，其结果也表明恩拉霉素对产气荚膜梭菌抑菌效果最强。
恩拉霉素在肠道内不被降解，能够保持原有的抗菌活性，且具有毒性低和优良的促生长及改善饲料利用率的作用[10]，在临床上预防产气荚膜梭菌病性疾病中具有参考意义。
参考文献：（10篇，略）
试验结果表明：（1）恩拉霉素抑菌作用最强，其MIC为1.6 μg/mL；（2）喹乙醇和15 %杆菌肽锌抑菌作用较强，它们的MIC分别为4 μg/mL和6 μg/mL；（3）黄霉素、硫酸黏霉素、吉他霉素抑菌作用较弱，它们的MIC分别为40 μg/mL、200 μg/mL、300 μg/mL；（4）盐霉素及盐酸金霉素对该产气荚膜梭菌野毒株几乎没有抑菌作用。由以上八种抗生素对产气荚膜梭菌的抑菌试验结果得出，八种抗生素对该产气荚膜梭菌野毒株均有不同程度的抑菌作用，而恩拉霉素对产气荚膜梭菌抑菌效果最强。
关键词：饲料添加剂类抗生素；猪源产气荚膜梭菌野毒株；抑菌试验；最低抑菌浓度（MIC）
中图分类号：S852.61 6.3 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2015）11-0046-02
产气荚膜梭菌（Clostridium Perfringens）是一种革兰氏阳性的专性厌氧杆菌，因其能形成芽孢的特性，故能够存在于猪的生态系统中[1]。在自然界也分布极广，可见于土壤、污水、饲料、食物、粪便以及动物肠道等中，也是动物肠道的正常菌群之一[2]。
产气荚膜梭菌致病作用主要在于它所产生的毒素，目前依据该菌能产生四种不同的主要毒素，将其分为A、B、C、D和E五个型[3]。而引起猪气性坏疽、肠毒血症和坏死性肠炎，主要是A型或C型产气荚膜梭菌[2]。A型产气荚膜梭菌感染率非常高，Gloria等在2011年調查48个猪场中产气荚膜梭菌流行情况中得出，87.5 %（42/48）的猪场存在A型产气荚膜梭菌感染[4]。Abdolvahab等在研究46头仔猪产气荚膜梭菌后得出，A型产气荚膜梭菌感染率100 %[5]。由于产气荚膜梭菌是一种条件性致病菌，一般情况下不发病，但在饲养管理不良、卫生条件差等不利条件下，动物肠道内环境菌群紊乱，很容易引起产气荚膜梭菌的大量繁殖产生毒素，进而导致产气荚膜梭菌性疾病发生[6，7]。该菌导致的猪猝死症发病急、病程短、死亡率高，为了减少产气荚膜梭菌给养殖业带来的损失，应加强疾病预防。本实验从江西万年县分离出一株产气荚膜梭菌，针对性地对江西地区的产气荚膜梭菌进行饲料添加剂的抑菌实验，故选用了多种饲料添加剂类抗生素对产气荚膜梭菌进行抑菌效果比较，研究出抑菌效果比较好的抗生素饲料添加剂，为饲料、养殖业临床应用提供一些理论依据。
1 材料和方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验菌株
由本实验室在江西万年县于2015年，从1～7日龄腹泻仔猪分离、鉴定和保存的A型产气荚膜梭菌。
1.1.2 培养基
液体硫乙醇酸盐培养基（FTG）、胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸（TSC）琼脂，均购置南昌万特科技有限公司。
1.1.3 试验药物（表1）
1.2 试验方法
1.2.1 试验药物的处理
根据兽药质量标准，对上述4 %恩拉霉素等八种药物进行处理，对药物进行溶解后于-20 ℃保存备用。
1.2.2 产气荚膜梭菌的准备
将保存的菌于TSC琼脂划线复苏，挑单个黑色菌落至10 mL FTG液体培养基中，37 ℃厌氧培养10 h后，用灭菌FTG培养基稀释到0.5麦氏比浊管（1×106 CFU/mL）浓度，待用。
1.2.3 采用试管稀释法测定八种药物的最低抑菌浓度
预实验确定各种药物最低抑菌浓度（MIC）范围，将处理好的药物用灭菌水进行倍比稀释，与A型产气荚膜梭菌分别加入FTG液体培养基中，使各种药物在试管中的终浓度如表2，将试验试管于37 ℃中培养24 h，通过肉眼观察细菌生长情况。试验结束后，如试管中的溶液澄清透明，说明没有细菌生长；如试管中有絮状细菌或混浊，说明有细菌生长。通过细菌是否生长来判定药物的MIC。
2 结果
（1） 4 %恩拉霉素对A型产气夹膜梭菌的抑菌试验结果如图1。
从图1可以看出1～3号试管中的溶液澄清透明，说明没有细菌生长；5号试管中的溶液有絮状物，6～7号试管浑浊，说明有细菌生长。因此，本试验中恩拉霉素对产气荚膜梭菌最小抑菌浓度（MIC）为1.6 μg/mL。
（2） 八种药物对A型产气荚膜梭菌野毒株的抑菌结果见表3。
3 结论
猪产气荚膜梭菌病主要是由A或C型产气荚膜梭菌引起的一种传染病，该病主要发生在1～7日龄新生仔猪，引起仔猪腹泻，发病急、病程短、死亡率高[8]。产气荚膜梭菌是一种条件性致病菌，鉴于产气荚膜梭菌的高感染率，实验选取八种常用饲料添加剂类抗生素，对其进行抑菌试验得出MIC，为预防产气荚膜梭菌性疾病提供参考依据，并减少养殖业损失。
由本试验结果得出，八种抗生素对A型产气荚膜梭菌野毒株均有不同程度的抑菌作用，其中以恩拉霉素抑菌作用最强，其MIC为1.6 μg/mL；其次为喹乙醇和15 %杆菌肽锌，他们的 MIC分别为4 μg/mL和6 μg/mL；最后黄霉素、硫酸黏霉素、吉他霉素抑菌作用较弱，他们的MIC分别为40 μg/mL、200 μg/mL、300 μg/mL；而盐霉素和盐酸金霉素对该A型产气荚膜梭菌野毒株几乎没有抑制作用。邹君彪[9]曾做过不同抗生素对产气荚膜梭菌抑菌试验研究，其结果也表明恩拉霉素对产气荚膜梭菌抑菌效果最强。
恩拉霉素在肠道内不被降解，能够保持原有的抗菌活性，且具有毒性低和优良的促生长及改善饲料利用率的作用[10]，在临床上预防产气荚膜梭菌病性疾病中具有参考意义。
参考文献：（10篇，略）