【摘 要】
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利用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）的方法，克隆肠道病毒71型（Enterovirus71，EV71）SHZH03株外壳蛋白VP2基因，构建酵母分泌型表达质粒pPIC9K／VP2，经序列测定证实Of-factor信号肽和VP2的
【机 构】
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江汉大学生命科学学院,武汉市黄陂人民医院
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利用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）的方法，克隆肠道病毒71型（Enterovirus71，EV71）SHZH03株外壳蛋白VP2基因，构建酵母分泌型表达质粒pPIC9K／VP2，经序列测定证实Of-factor信号肽和VP2的序列和阅读框正确后，用SacI酶切使之线性化，电转化法将目的基因整合到宿主菌GS115基因组上；经转化子表型筛选和PCR分析鉴定后，甲醇诱导筛选到高效表达VP2蛋白的工程菌株。用饱和硫酸铵法对重组蛋白VP2进行了较好的纯化。Western Blot分析表明，重组蛋白VP2具有较
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