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目的 比较刚地弓形虫重组蛋白表面抗原1 (rSAG1)与rSAG4单独及联合诱导昆明小鼠的免疫保护性作用,为研制复合型疫苗分子提供参考. 方法 以弓形虫RH株基因组DNA为模板,PCR扩增SAG1和SAG4,构建重组质粒pET-28a (+)-SAG1和pET-28a (+)-SAG4;经双酶切和测序鉴定后,将序列正确的重组质粒转入BL21 (DE3)中,挑选阳性菌落,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌体,超声裂菌.在变性条件下经镍离子亲合层析柱纯化目的蛋白,采用透析逐步降低尿素浓度的方法进行目的蛋白复性;125只昆明小鼠按照随机数字表法分为5组,每组25只,分别为rSAG1免疫组、rSAG4免疫组、rSAG1+rSAG4联合免疫组、PBS对照组、PBS+佐剂对照组,首次免疫为重组蛋白100μg/鼠,与等体积完全弗氏佐剂充分乳化后进行皮下多点注射,间隔2周加强免疫1次,连续2次,加强免疫时重组蛋白为50 μg/鼠,与等体积弗氏不完全佐剂乳化,对照组小鼠注射等量PBS.各组小鼠于免疫前(0周)及首次免疫后第2、4、6周断尾取血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清特异性抗体IgG.在首次免疫后第6周,每只小鼠经腹腔注射3 000个弓形虫RH株速殖子进行攻击感染,观察小鼠生存时间,采用SPSS 16.0软件进行统计学分析. 结果 弓形虫RH株SAG1和SAG4基因经PCR扩增后,目的片段大小分别为780和438 bp,与理论大小一致;重组质粒pET-28a (+)-SAG1和pET-28a (+)-SAG4经双酶切和测序鉴定后,特异片段长度与SAG1和SAG4理论大小780和438 bp一致,测序结果显示,重组基因与目的基因序列完全一致;rSAG1、rSAG4相对分子质量(Mr)为28 970、17 720,与理论值一致,经纯化和复性后获得较纯的可溶性蛋白;rSAG1免疫组小鼠血清特异抗体IgG吸光度(A450值)为1.821±0.184,明显高于rSAG4免疫组(0.695±0.089) (P＜ 0.05),但低于rSAG1+rSAG4联合免疫组(1.955±0.097) (P＜0.05).PBS组和PBS+佐剂组分别为0.019±0.002、0.020±0.004,rSAG1、rSAG4和rSAG1+rSAG4联合免疫组均高于两对照组(P＜0.05);经弓形虫速殖子攻击感染后,对照组小鼠均在224 h内全部死亡,rSAG1、rSAG4免疫组及联合免疫组分别在296、288及320 h内全部死亡,各免疫组与各对照组之间、rSAG4免疫组与联合免疫组之间生存时间差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 rSAG1、rSAG4和rSAG1+rSAG4均能诱导小鼠产生抗弓形虫感染的免疫保护作用,明显延长实验小鼠的存活时间,联合免疫保护效果要略优于单抗原免疫.