探讨p300-TIP60/Sirt1对急性期川崎病(KD)Foxp3蛋白乙酰化的影响及其在KD免疫发病机制中的作用。
方法急性期KD患儿38例，正常同年龄对照组32例，KD患儿分别于丙种球蛋白(IVIG)治疗前、后直接取血备检。采用免疫共沉淀-印迹法检测外周血CD4＋ T细胞Foxp3蛋白乙酰化及p300、TIP60和Sirt1结合水平；流式细胞术检测外周血CD4＋CD25highFoxp3＋细胞(Treg)比例及Foxp3、pAMPK、p300、TIP60、Sirt1蛋白表达水平；实时荧光定量PCR检测Treg细胞细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(GITR)、IL-10、肝激酶B1(LKB1)、烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)、早期生长应答因子-1(EGR-1)、转化生长因子β受体-1(TGF-βRⅠ) mRNA表达；ELISA检测外周血血浆中TGF-β浓度。
结果(1)急性期KD患儿Treg细胞比例、抑制功能相关分子表达(CTLA-4、GITR、IL-10)、Foxp3蛋白及乙酰化水平显著降低(P<0.05)，其中KD合并冠状动脉损伤组(KD-CAL＋)前述各项均低于无冠状动脉损伤组(KD-CAL－，P<0.05)，经IVIG治疗后明显恢复(P<0.05)。(2)急性期KD患儿Treg细胞乙酰化酶p300、TIP60表达及Foxp3结合水平显著下调(P<0.05)，而去乙酰化酶Sirt1表达及Foxp3结合水平明显增加(P<0.05)，且p300/Sirt1、TIP60/Sirt1表达比值与Foxp3蛋白乙酰化水平呈正相关关系(r＝0.52、0.46; P<0.05)，经IVIG治疗后均明显恢复(P<0.05)。其中KD-CAL＋组p300、TIP60表达及Foxp3结合水平明显低于KD-CAL－组(P<0.05)，而Sirt1表达及Foxp3结合水平则明显高于后者(P<0.05)。(3)急性期KD患儿血浆TGF-β及Treg细胞TGF-βRⅠ、EGR-1表达显著下调(P<0.05)，而LKB1、pAMPK、NAMPT表达明显增加(P<0.05)，其中KD-CAL＋组前3项明显低于KD-CAL－组(P<0.05)，而LKB1、pAMPK、NAMPT表达明显高于KD-CAL－组(P<0.05)，经IVIG治疗后均有不同程度恢复(P<0.05)。
结论p300-TIP60/Sirt1表达失衡所导致的Foxp3蛋白乙酰化水平低下可能与急性期KD患儿免疫功能紊乱有关。