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摘 要：本文在参考国内外文献的基础上，对超高效液相色谱串联质谱法测定猪肉中的氟哌啶醇残留进行了探讨。在碱性条件下，经过1 h的80 ℃水浴，用无水乙醚两次提取，吹干提取液后，用1.00 mL 流动相（5 mmoL/L乙酸铵 乙腈）复溶，过膜后上UPLC-MS/MS测定，建立了猪肉中氟哌啶醇残留的超高效液相色谱串联质谱检测方法。具有良好的线性关系，相关系数r=0.999 65；经测定方法检出限确定为0.053 μg/kg，可满足实际检测需要；加标回收试验的变异系数及回收率范围等结果满足GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范 食品理化检测》的要求。本试验方法前处理过程简便、快捷、易操作，UPLC-MS-MS及流动相梯度等一系列的条件设置合理，经UPLC-MS-MS打碎后的定性定量离子辨识度高，有较高的响应，测得检出限可满足检测需求，验证结果具有较好的精密度和准确度，可用于猪肉中氟哌啶醇残留检测。
关键词：猪肉，氟哌啶醇；检测方法
中图分类号：S859.79 6 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2015）08-0040-03
氟哌啶醇，丁酰苯类抗精神病药的主要代表，作用与氯丙嗪相似，有较强的多巴胺受体拮抗作用。化学名称，1-（ 4-氟苯基）-4-〔4-（ 4-氯苯基）-4-羟基-1-哌啶基〕-1-丁酮；分子式，C21H23ClFN02；分子量，375。特点为：抗焦虑症、抗精神病作用强而久，对精神分裂症与其他精神病的躁狂症状都有效。镇吐作用亦较强，但镇静作用弱[1]。主要用于：各种急、慢性精神分裂症，特别适合于急性青春型和伴有敌对情绪及攻击行动的偏执型精神分裂症[2]，亦可用于对吩噻嗪类治疗无效的其他类型或慢性精神分裂症[3]。有时被违法添加到动物养殖过程中[4]，由于其镇静、催眠作用，会降低动物对外界刺激的反应[5]，过度镇静作用会使动物反应迟钝、面部表情呆板等诸多不良反应，严重者会威胁到动物或人的生命安全[6]。2011年4月22日，卫生部发布了被滥用食品添加剂及非法添加物名单，其中就包括了猪肉中违法添加镇静剂类药物。因此，动物源性组织中氟哌啶醇残留的检测则非常重要，而关于氟哌啶醇检测方法的研究却鲜有报道。本试验是在碱性条件下，用无水乙醚提取猪肉中的氟哌啶醇残留物[7]，吹干后用流动相复溶，上机测定。
1 主要仪器设备与试剂
所用仪器为：液相色谱串联质谱联用仪Waters AcQuity UPLC/XoVo TQMS，百位电子天平，离心机，氮吹仪，水浴摇床。主要试剂：氟哌啶醇标准品（Sigma公司），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），无水乙醚，氢氧化钠，乙酸，乙酸铵缓冲溶液，滤膜（津腾：0.22 μm，有机相），二次蒸馏水等。
2 试验方法
称取样品2.00 g样品于50 mL离心管中，加入200 μL 乙腈，涡旋混合60 s，混合后加入400 μL 5 moL/L的氢氧化钠溶液，再涡旋混合60 s。80 ℃水浴中放置1 h。在此期间，每个样品均进行两次涡流混合。1 h后，将样品从水浴中取出并冷却至室温。加入5 mL无水乙醚，涡旋混合30 s，充分振荡15 min，取出，7 000 r/min离心5 min。移取上层上清液。重复提取一次，合并上清液。45 ℃水浴氮吹仪氮气吹干。用1.00 mL 流动相（5 mmoL/L乙酸铵 乙腈）溶解定容，充分涡旋混合，过0.22 μm有机相滤膜，上机测定。
3 上机测定
液相色谱及质谱条件：
色谱柱：ACQUITYUPLC BEH C18（1.7 μm， 3.0 mm X 100 mm）或相当者；
柱温：40 ℃；
流动相：5 mmoL/L乙酸铵 乙腈（55 45）；流动相梯度条件见表1。
流速：0.300 mL/min；
进样量：5.0 μL；
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：负离子扫描；
检测方式：多反应监测（MRM）；
电喷雾电压：-1 750 V；
辅助气温度：500 ℃；
定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压及碰撞能量见表2。
4结果与分析
4.1 线性试验
按方法条件设置仪器参数，配制一系列浓度的标准样品溶液（0.10 ng/mL、0.50 ng/mL、1.00 ng/mL、 2.00 ng/mL、4.00 ng/mL、8.00 ng/mL），待仪器基线稳定后，对系列标准样品溶液进行测定，绘制标准曲线，其相关系数r=0.999 65（图1）。
4.2 方法检出限确定
取空白猪肉样品，添加浓度为0.50 μg/kg，按照上述方法全过程进行预处理和测定，平行样品n=7，根据各样品检测值（0.410 μg/kg、0.414 μg/kg、 0.421 μg/kg、，0.427 μg/kg、0.434 μg/kg、 0.456 μg/kg，0.427 μg/kg），计算出平均值X（0.427 μg/kg）及标准偏差Sb（0.015 2），当被分析物的回收率在70 %～120 %之间时，可计算检出限为0.053 μg/kg。计算公式如下：
检出限（MDL）=（k×Sb×C）/X ，其中k为置信因子，一般取3。
4.3 方法精密度和回收率实验
以空白猪肉样品为基质，进行加标回收试验，加标浓度分别为0.60 μg/kg、1.00 μg/kg、 3.00 μg/kg。将加标样品和空白样品按方法进行前处理，上机测试，结果见表3、表4、表5及图2。
5 结论
经过多次试验验证，本方法用于猪肉中氟哌啶醇药物残留的测定，一系列浓度的标准样品溶液0.10 ng/mL、0.50 ng/mL、1.00 ng/mL、 2.00 ng/mL、4.00 ng/mL、8.00 ng/mL）的标准曲线相关系数r=0.999 65；经测定方法检出限确定为0.053 μg/kg，可满足检测需要；0.60 μg/kg、 1.00 μg/kg和3.00 μg/kg加标试验变异系数分别为 2.92 %、4.83 %和3.20 %，加标试验回收率范围分别为80.00 %～86.70 %、81.00 %～ 93.00 %和86.00 %～92.33 %。方法验证结果满足GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》[8]的要求。
本试验方法前处理过程简便、快捷、易操作，UPLC-MS-MS及流动相梯度等一系列的条件设置合理，经UPLC-MS-MS打碎后的定性定量离子辨识度高，有较高的响应，测得检出限可满足检测需求，验证结果具有较好的精密度和准确度，可用于猪肉中氟哌啶醇残留检测。 □□
关键词：猪肉，氟哌啶醇；检测方法
中图分类号：S859.79 6 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2015）08-0040-03
氟哌啶醇，丁酰苯类抗精神病药的主要代表，作用与氯丙嗪相似，有较强的多巴胺受体拮抗作用。化学名称，1-（ 4-氟苯基）-4-〔4-（ 4-氯苯基）-4-羟基-1-哌啶基〕-1-丁酮；分子式，C21H23ClFN02；分子量，375。特点为：抗焦虑症、抗精神病作用强而久，对精神分裂症与其他精神病的躁狂症状都有效。镇吐作用亦较强，但镇静作用弱[1]。主要用于：各种急、慢性精神分裂症，特别适合于急性青春型和伴有敌对情绪及攻击行动的偏执型精神分裂症[2]，亦可用于对吩噻嗪类治疗无效的其他类型或慢性精神分裂症[3]。有时被违法添加到动物养殖过程中[4]，由于其镇静、催眠作用，会降低动物对外界刺激的反应[5]，过度镇静作用会使动物反应迟钝、面部表情呆板等诸多不良反应，严重者会威胁到动物或人的生命安全[6]。2011年4月22日，卫生部发布了被滥用食品添加剂及非法添加物名单，其中就包括了猪肉中违法添加镇静剂类药物。因此，动物源性组织中氟哌啶醇残留的检测则非常重要，而关于氟哌啶醇检测方法的研究却鲜有报道。本试验是在碱性条件下，用无水乙醚提取猪肉中的氟哌啶醇残留物[7]，吹干后用流动相复溶，上机测定。
1 主要仪器设备与试剂
所用仪器为：液相色谱串联质谱联用仪Waters AcQuity UPLC/XoVo TQMS，百位电子天平，离心机，氮吹仪，水浴摇床。主要试剂：氟哌啶醇标准品（Sigma公司），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），无水乙醚，氢氧化钠，乙酸，乙酸铵缓冲溶液，滤膜（津腾：0.22 μm，有机相），二次蒸馏水等。
2 试验方法
称取样品2.00 g样品于50 mL离心管中，加入200 μL 乙腈，涡旋混合60 s，混合后加入400 μL 5 moL/L的氢氧化钠溶液，再涡旋混合60 s。80 ℃水浴中放置1 h。在此期间，每个样品均进行两次涡流混合。1 h后，将样品从水浴中取出并冷却至室温。加入5 mL无水乙醚，涡旋混合30 s，充分振荡15 min，取出，7 000 r/min离心5 min。移取上层上清液。重复提取一次，合并上清液。45 ℃水浴氮吹仪氮气吹干。用1.00 mL 流动相（5 mmoL/L乙酸铵 乙腈）溶解定容，充分涡旋混合，过0.22 μm有机相滤膜，上机测定。
3 上机测定
液相色谱及质谱条件：
色谱柱：ACQUITYUPLC BEH C18（1.7 μm， 3.0 mm X 100 mm）或相当者；
柱温：40 ℃；
流动相：5 mmoL/L乙酸铵 乙腈（55 45）；流动相梯度条件见表1。
流速：0.300 mL/min；
进样量：5.0 μL；
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：负离子扫描；
检测方式：多反应监测（MRM）；
电喷雾电压：-1 750 V；
辅助气温度：500 ℃；
定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压及碰撞能量见表2。
4结果与分析
4.1 线性试验
按方法条件设置仪器参数，配制一系列浓度的标准样品溶液（0.10 ng/mL、0.50 ng/mL、1.00 ng/mL、 2.00 ng/mL、4.00 ng/mL、8.00 ng/mL），待仪器基线稳定后，对系列标准样品溶液进行测定，绘制标准曲线，其相关系数r=0.999 65（图1）。
4.2 方法检出限确定
取空白猪肉样品，添加浓度为0.50 μg/kg，按照上述方法全过程进行预处理和测定，平行样品n=7，根据各样品检测值（0.410 μg/kg、0.414 μg/kg、 0.421 μg/kg、，0.427 μg/kg、0.434 μg/kg、 0.456 μg/kg，0.427 μg/kg），计算出平均值X（0.427 μg/kg）及标准偏差Sb（0.015 2），当被分析物的回收率在70 %～120 %之间时，可计算检出限为0.053 μg/kg。计算公式如下：
检出限（MDL）=（k×Sb×C）/X ，其中k为置信因子，一般取3。
4.3 方法精密度和回收率实验
以空白猪肉样品为基质，进行加标回收试验，加标浓度分别为0.60 μg/kg、1.00 μg/kg、 3.00 μg/kg。将加标样品和空白样品按方法进行前处理，上机测试，结果见表3、表4、表5及图2。
5 结论
经过多次试验验证，本方法用于猪肉中氟哌啶醇药物残留的测定，一系列浓度的标准样品溶液0.10 ng/mL、0.50 ng/mL、1.00 ng/mL、 2.00 ng/mL、4.00 ng/mL、8.00 ng/mL）的标准曲线相关系数r=0.999 65；经测定方法检出限确定为0.053 μg/kg，可满足检测需要；0.60 μg/kg、 1.00 μg/kg和3.00 μg/kg加标试验变异系数分别为 2.92 %、4.83 %和3.20 %，加标试验回收率范围分别为80.00 %～86.70 %、81.00 %～ 93.00 %和86.00 %～92.33 %。方法验证结果满足GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》[8]的要求。
本试验方法前处理过程简便、快捷、易操作，UPLC-MS-MS及流动相梯度等一系列的条件设置合理，经UPLC-MS-MS打碎后的定性定量离子辨识度高，有较高的响应，测得检出限可满足检测需求，验证结果具有较好的精密度和准确度，可用于猪肉中氟哌啶醇残留检测。 □□