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摘 要：目的：采用高效液相色谱法测定丹参药材中丹参素的含量。方法：色谱柱：KromailsC18（250mm×4.6，5μm）；流动相：甲醇-0.5%冰醋酸（1：5）；流速：1.0ml/min；温度为室温；检测波长：280nm。结果：该批丹参中丹参素的含量为0.38%，平均回收率为98.6%，RSD=1.6%。结论：该法操作简便，精确度高，可靠性强，可作为丹参和复方丹参制剂质量控制的标准。
关键词：高效液相色法；丹参；丹参素；含量测定
作为一种较为珍贵的中药药材，丹参在中医临床上发挥了非常大的作用，尤其是在祛瘀止痛、活血通经与清心除烦等方面更是有着显著疗效。丹参是一种唇形科植物，在中药的应用中，所指的丹参一般是指该植物的干燥根茎。从药理学上来讲，丹参的主要药效成分是其脂溶性丹参酮类物质以及水溶性丹参素与丹参酸类物质。基于这种原理，在丹参的提取中一般多使用水提取法。为了能够对丹参药材中的丹参素含量有一个较为全面的掌握，需要对其进行含量测定。测定方法有很多种，本研究选取了使用较为广泛的高效液相色谱法来对丹参药材中的丹参素含量进行测定，希望能够为相关研究提供一些帮助。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪：Agilentll00系列四元梯度泵、Agilentll00手动进样器、Agilentll00系列二极管阵列检测器、Agilent1100工作站（Agilent公司）；超声波清洗器；1/10000电子分析天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司）。
1.2 试药
甲醇（色谱纯）；水为二次石英亚沸蒸馏水；冰醋酸（分析纯）；丹参素钠对照品（复旦大学药学院天然药物化学教研室提供，含量>99%；批号：2003-08-29）；所用化学试剂均为分析纯。不同批号丹参药材样品均经鉴定为Salviamiltiorrhiza。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱
KromailsC18（250mm×4.6，5μm）；流动相：甲醇-0.5%冰醋酸（1：5）；流速：1.0ml/min；丹参素的保留时间（tR）约为11min。理论塔板数以丹参素峰计算为6300，丹参素与其他组分峰的分离度大于1.5；温度为室温；检测波长：280nm。
2.2 方法考察
2.2.1 流动相的选择。用不同流动相，如甲醇-水、乙脂-水及甲醇-醋酸溶液进行分析，结果表明，用甲醇-0.2%醋酸溶液（1：5）可有效地将丹参素与其他成分分开。
2.2.2 流动相不同酸度的选择。用0.1%，0.2%，0.3%，0.4%，0.5%醋酸溶液分别与甲醇（5：1）作流动相进行比较，结果表明，0.5%醋酸溶液-甲醇（5：1）时，分离效果差，0.1%醋酸溶液-甲醇（5：1）时，峰面积较小，用0.2%醋酸溶液-甲醇（5：1）时，虽然丹参素保留时间延后些，但基线较平，分离效果好，并且其峰面积值相对较大，所以选择0.2%醋酸溶液-甲醇（5：1）作为流动相。
2.2.3 提取溶剂的选择。分别用水、甲醇、50%甲醇、0.2%醋酸溶液进行提取，结果表明，0.2%酯酸溶液能将样品提取完全。
2.2.4 提取方法的选择。分别用超声、冷浸、微波、热提进行提取，结果表明，热提丹素含量高，重复性较好，并且甲醇-0.2%酸酸溶液（1：5）色谱条件下分离效果好。
2.2.5 提取时间的确定。取丹参药材粉末约0.4g（过40目筛），精密称定，加0.2%醋酸溶液10gml，称定重量，分别按表1条件加热回流，提取，冷却，补足减失的醋酸溶液，微孔滤膜过滤，取续滤液，20μl进样测定。加热回流时间分别为2h、3h、4h、5h、6h。结果示5h与6h相差无几。说明回流5h丹参素基本提取完全，因此提取时间定为5h。（见表1）
2.3 方法与结果
2.3.1 对照品溶液的制备。精密称取丹参素钠对照品0.5mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀，即得（每1ml中含丹参素钠20μg）。
2.3.2 样品溶液的制备。取丹参样品药材粉末（过40目筛）约0.4g，精密称定，加0.2%醋酸溶液10ml，称定重量，加热回流5h，放冷，补足减失的醋酸溶液，微孔滤膜过滤，取续滤液，10μl进样测定。
2.3.3 线性关系。精密称取丹参素钠对照品20.1mg（相当于丹参素18.1mg），置250ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得每1ml含0.0724mg的对照品储备液溶液。分别精密吸取对照品储备液2、4、6、8、10ml于5个10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得14.32、28.64、42.96、57.28、71.6μg/ml的系列对照品溶液。
分别精密吸取系列对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积对丹参素溶液浓度（μg/ml）进行线性回归计算，得线性回归方程：Y=6.3101×10-4X-0.7864（r=0.9994），线性范围：14.47～72.36μg/ml。（见表2）
2.3.4 精密度试验。精密吸取对照品溶液10μl，连续进样5次，测定峰面积，RSD=0.38%（n=5）。
2.3.5 稳定性试验。取丹参素对照品溶液，分别在制备后每隔1h，按“2.3.2”项下色谱条件测定峰面积，结果RSD为0.1%（n=5），表明在24h内基本稳定。
2.3.6 重现性试验。取同一批丹参药材（批号：20030829）供试品，按上述的供试品溶液的制备方法制备5份供试液，分别进样，测定峰面积，结果RSD=1.6%。
2.3.7 回收率试验。称取已测定含量的同批丹参药材（批号：20030829含量：0.382%）5份，精密加入每1ml含丹参素17.2μg的水溶液50ml，按上述的供试品溶液的制备方法制备5份供试液，分别进样，测定峰面积，计算回收率，丹参素的平均回收率为98.6%，RSD=1.6%，（n=5）。（见表3）
2.3.8 样品测定。分别精密吸取不同批号丹参药材对照品溶液和供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，计算含量，结果：本批丹参中丹参素含量为0.38%。
3 讨论
通过本实验可以看出，在丹参药材中，丹参素是最主要的药效成分，其含量的多少决定了该药材的药效好坏。在对其丹参素含量进行测定时，可以发现丹参素的解离在很大程度与其提取液PH值有关。为此在今后的丹参素含量测定过程中，笔者建议最好在提取液中加入一定的酸。这样做的目的是为了把丹参素充分的提取出来。另外，从研究中可以看出，在采用高效液相色谱法对丹参素含量进行测定时，流动相酸度越高，保留时间越短，但丹參素不能回到基线上，分离效果差，且酸浓度大于色谱柱寿命短。经测定本实验中流动相pH>3，对色谱柱影响不大。本法重现性好、准确度高，可作为丹参和复方丹参制剂质量控制的标准。
参考文献
[1]陶春梅，于治国，袁璐，林燕芝.丹参药材中丹参素和原儿茶醛含量的HPLC测定法[J].西北药学杂志，2006（4）.
[2]李桃，王春娥.高效液相色谱法测定丹参药材中丹参素的含量[J].中国医院药学杂志，2005（9）.
[3]黄敬群，张秀巧，郭军，张莉.高效液相色谱法测定5种不同产地丹参中丹参素和原儿茶醛含量[J].安徽中医学院学报，2005（1）.
[4]朱立彬，吴志明，何明三.高效液相色谱法测定丹参药材中丹参素的含量[J].湖北中医学院学报，2004（3）.
关键词：高效液相色法；丹参；丹参素；含量测定
作为一种较为珍贵的中药药材，丹参在中医临床上发挥了非常大的作用，尤其是在祛瘀止痛、活血通经与清心除烦等方面更是有着显著疗效。丹参是一种唇形科植物，在中药的应用中，所指的丹参一般是指该植物的干燥根茎。从药理学上来讲，丹参的主要药效成分是其脂溶性丹参酮类物质以及水溶性丹参素与丹参酸类物质。基于这种原理，在丹参的提取中一般多使用水提取法。为了能够对丹参药材中的丹参素含量有一个较为全面的掌握，需要对其进行含量测定。测定方法有很多种，本研究选取了使用较为广泛的高效液相色谱法来对丹参药材中的丹参素含量进行测定，希望能够为相关研究提供一些帮助。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪：Agilentll00系列四元梯度泵、Agilentll00手动进样器、Agilentll00系列二极管阵列检测器、Agilent1100工作站（Agilent公司）；超声波清洗器；1/10000电子分析天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司）。
1.2 试药
甲醇（色谱纯）；水为二次石英亚沸蒸馏水；冰醋酸（分析纯）；丹参素钠对照品（复旦大学药学院天然药物化学教研室提供，含量>99%；批号：2003-08-29）；所用化学试剂均为分析纯。不同批号丹参药材样品均经鉴定为Salviamiltiorrhiza。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱
KromailsC18（250mm×4.6，5μm）；流动相：甲醇-0.5%冰醋酸（1：5）；流速：1.0ml/min；丹参素的保留时间（tR）约为11min。理论塔板数以丹参素峰计算为6300，丹参素与其他组分峰的分离度大于1.5；温度为室温；检测波长：280nm。
2.2 方法考察
2.2.1 流动相的选择。用不同流动相，如甲醇-水、乙脂-水及甲醇-醋酸溶液进行分析，结果表明，用甲醇-0.2%醋酸溶液（1：5）可有效地将丹参素与其他成分分开。
2.2.2 流动相不同酸度的选择。用0.1%，0.2%，0.3%，0.4%，0.5%醋酸溶液分别与甲醇（5：1）作流动相进行比较，结果表明，0.5%醋酸溶液-甲醇（5：1）时，分离效果差，0.1%醋酸溶液-甲醇（5：1）时，峰面积较小，用0.2%醋酸溶液-甲醇（5：1）时，虽然丹参素保留时间延后些，但基线较平，分离效果好，并且其峰面积值相对较大，所以选择0.2%醋酸溶液-甲醇（5：1）作为流动相。
2.2.3 提取溶剂的选择。分别用水、甲醇、50%甲醇、0.2%醋酸溶液进行提取，结果表明，0.2%酯酸溶液能将样品提取完全。
2.2.4 提取方法的选择。分别用超声、冷浸、微波、热提进行提取，结果表明，热提丹素含量高，重复性较好，并且甲醇-0.2%酸酸溶液（1：5）色谱条件下分离效果好。
2.2.5 提取时间的确定。取丹参药材粉末约0.4g（过40目筛），精密称定，加0.2%醋酸溶液10gml，称定重量，分别按表1条件加热回流，提取，冷却，补足减失的醋酸溶液，微孔滤膜过滤，取续滤液，20μl进样测定。加热回流时间分别为2h、3h、4h、5h、6h。结果示5h与6h相差无几。说明回流5h丹参素基本提取完全，因此提取时间定为5h。（见表1）
2.3 方法与结果
2.3.1 对照品溶液的制备。精密称取丹参素钠对照品0.5mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀，即得（每1ml中含丹参素钠20μg）。
2.3.2 样品溶液的制备。取丹参样品药材粉末（过40目筛）约0.4g，精密称定，加0.2%醋酸溶液10ml，称定重量，加热回流5h，放冷，补足减失的醋酸溶液，微孔滤膜过滤，取续滤液，10μl进样测定。
2.3.3 线性关系。精密称取丹参素钠对照品20.1mg（相当于丹参素18.1mg），置250ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得每1ml含0.0724mg的对照品储备液溶液。分别精密吸取对照品储备液2、4、6、8、10ml于5个10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得14.32、28.64、42.96、57.28、71.6μg/ml的系列对照品溶液。
分别精密吸取系列对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积对丹参素溶液浓度（μg/ml）进行线性回归计算，得线性回归方程：Y=6.3101×10-4X-0.7864（r=0.9994），线性范围：14.47～72.36μg/ml。（见表2）
2.3.4 精密度试验。精密吸取对照品溶液10μl，连续进样5次，测定峰面积，RSD=0.38%（n=5）。
2.3.5 稳定性试验。取丹参素对照品溶液，分别在制备后每隔1h，按“2.3.2”项下色谱条件测定峰面积，结果RSD为0.1%（n=5），表明在24h内基本稳定。
2.3.6 重现性试验。取同一批丹参药材（批号：20030829）供试品，按上述的供试品溶液的制备方法制备5份供试液，分别进样，测定峰面积，结果RSD=1.6%。
2.3.7 回收率试验。称取已测定含量的同批丹参药材（批号：20030829含量：0.382%）5份，精密加入每1ml含丹参素17.2μg的水溶液50ml，按上述的供试品溶液的制备方法制备5份供试液，分别进样，测定峰面积，计算回收率，丹参素的平均回收率为98.6%，RSD=1.6%，（n=5）。（见表3）
2.3.8 样品测定。分别精密吸取不同批号丹参药材对照品溶液和供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，计算含量，结果：本批丹参中丹参素含量为0.38%。
3 讨论
通过本实验可以看出，在丹参药材中，丹参素是最主要的药效成分，其含量的多少决定了该药材的药效好坏。在对其丹参素含量进行测定时，可以发现丹参素的解离在很大程度与其提取液PH值有关。为此在今后的丹参素含量测定过程中，笔者建议最好在提取液中加入一定的酸。这样做的目的是为了把丹参素充分的提取出来。另外，从研究中可以看出，在采用高效液相色谱法对丹参素含量进行测定时，流动相酸度越高，保留时间越短，但丹參素不能回到基线上，分离效果差，且酸浓度大于色谱柱寿命短。经测定本实验中流动相pH>3，对色谱柱影响不大。本法重现性好、准确度高，可作为丹参和复方丹参制剂质量控制的标准。
参考文献
[1]陶春梅，于治国，袁璐，林燕芝.丹参药材中丹参素和原儿茶醛含量的HPLC测定法[J].西北药学杂志，2006（4）.
[2]李桃，王春娥.高效液相色谱法测定丹参药材中丹参素的含量[J].中国医院药学杂志，2005（9）.
[3]黄敬群，张秀巧，郭军，张莉.高效液相色谱法测定5种不同产地丹参中丹参素和原儿茶醛含量[J].安徽中医学院学报，2005（1）.
[4]朱立彬，吴志明，何明三.高效液相色谱法测定丹参药材中丹参素的含量[J].湖北中医学院学报，2004（3）.