寨卡病毒感染HUVECs和SH-SY5Ys激活炎症因子表达及诱导细胞凋亡和焦亡的研究

来源 :中国病原生物学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tanhuafuren
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目的 观察寨卡病毒感染HUVECs和SH-SY5Ys后引起炎症因子的变化,以及诱导细胞死亡的方式. 方法 用寨卡病毒感染H UVECs和SH-SY5Ys,在不同时间点收集细胞培养上清并提取细胞总RNA和细胞总蛋白.采用Luminex xMAP技术检测上清中GM-CSF、IL-6、IL-8、TNFα、CCL-2、MDC、CCL5、INFα、MDC、IL 12p70细胞因子含量;采用荧光定量PCR检测目的基因在mRNA水平的相对表达量;采用Western blot检测目的基因在蛋白水平的相对表达量;采用CCK-8检测细胞活力;采用LDH释放试验检测细胞膜损伤程度;采用流式细胞术枪测细胞Annexin VFITC/PI双标染色细胞分群. 结果 寨卡病毒感染HUVECs和SH-SY5Ys后引起GM-CSF、IL-6、IL-8、TNFα、CCL-2、CCL-5分泌增加,荧光定量PCR结果与Luminex xMAP检测结果一致;寨卡病毒感染HUVECs和SH-SY5Ys 72h后焦亡相关基因在mRNA水平表达增加,焦亡相关蛋白被激活,细胞活力下降50%,细胞膜完整性丧失,转染siRNA-NLRP3或加入NLRP3抑制剂MCC950、Caspase-1抑制剂VX-765后再感染寨卡病毒焦亡相关蛋白活性降低;寨卡病毒感染HUVECs后凋亡相关蛋白表达增加,流式检测凋亡细胞群占比增加. 结论 寨卡病毒感染HUVECs和SHSY5Ys后引起GM-CSF、IL-6、IL-8、TNFα、CCL-2、CCL-5表达增加,可能与寨卡病毒引起的炎症因子风暴相关;寨卡病毒感染两种细胞后激活Caspase-1引起的细胞焦亡部分依赖于NLRP3炎症小体途径;寨卡病毒感染HUVECs同时引起依赖于Caspase-3的细胞凋亡.
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