【摘 要】
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目的 构建白念珠菌UBC9基因缺失株,探索UBC9基因缺失对细胞形态转换和生物被膜形成的影响. 方法 采用瞬时CRISPR/Cas9基因敲除系统,分别于体外扩增Cas9基因、sgRNA以及修复DN
【机 构】
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南通大学医学院病原生物学系,江苏南通226001
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目的 构建白念珠菌UBC9基因缺失株,探索UBC9基因缺失对细胞形态转换和生物被膜形成的影响. 方法 采用瞬时CRISPR/Cas9基因敲除系统,分别于体外扩增Cas9基因、sgRNA以及修复DNA,通过醋酸锂法转化白念珠菌野生型菌株SN148,于SD-His选择培养基筛选转化子,通过菌落PCR验证基因型,构建UBC9双等位基因缺失株.分别检测UBC9缺失株在液体培养基中的细胞形态、固体YPD平板上的菌落形态和浸入生长情况以及生物被膜形成能力. 结果 PCR检测发现UBC9双等位基因缺失株中能扩出约2.8 kb的单一条带,UBC9基因缺失导致液体培养基中细胞伸长主要以菌丝态形式存在,固体培养基上菌落表面粗糙且深入到培养基内呈典型的浸入生长,并且生物被膜形成能力显著增高(A值为10.31,约为野生型的10.3倍). 结论 利用CRISPR/Cas9系统快速构建了白念珠菌UBC9纯合子缺失株,且证明UBC9参与细胞的形态调控和生物被膜形成.
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