【摘 要】
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目的 探讨肝癌细胞系HCCLM6细胞的酪氨酸磷酸化(pTyr)肽段富集方法 ,建立快速、高效和高特异性的酪氨酸磷酸化蛋白质组学实验技术.方法通过基于SH2超亲体材料酪氨酸磷酸化肽
【机 构】
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安徽医科大学,合肥 230032;军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,生命组学研究所,蛋白质组学国家重点实验室,国家蛋白质科学中心(北京),北京 102206
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目的 探讨肝癌细胞系HCCLM6细胞的酪氨酸磷酸化(pTyr)肽段富集方法 ,建立快速、高效和高特异性的酪氨酸磷酸化蛋白质组学实验技术.方法通过基于SH2超亲体材料酪氨酸磷酸化肽段亲和纯化技术,并结合液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)实现HCCLM6细胞中酪氨酸磷酸化肽段的大规模富集;通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测HCCLM6细胞蛋白的提取质量;LC-MS/MS检测富集得到的酪氨酸磷酸化肽段;采用MaxQuant软件实现对质谱数据的分析.结果 实现了对HCCLM6细胞酪氨酸磷酸化肽段的大规模富集,建立了稳定高效的酪氨酸磷酸化蛋白质组学实验技术,共鉴定到1105个酪氨酸磷酸化蛋白,2666个酪氨酸磷酸化肽段,1884个酪氨酸磷酸化位点;酪氨酸磷酸化蛋白主要富集在黏附、细胞内吞、紧密连接等与转移相关的生物学进程;所鉴定的多种酪氨酸磷酸化蛋白质有效补充了已报道的酪氨酸磷酸化数据库,可为肝癌转移机制相关研究提供新的治疗靶点.结论 建立了稳定高效的酪氨酸磷酸化蛋白质组学实验技术,实现了对HCCLM6细胞酪氨酸磷酸化肽段的大规模富集.
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